Эндонуклеазы рестрикции FastDigest — быстрый гидролиз в универсальном буфере. Обзор

04.02.2022

Эндонуклеазы рестрикции FastDigest — это 176 ферментов полностью активных в одном универсальном буфере FastDigest и FastDigest Green, позволяющих проводить гидролиз за 5-15 минут.

Буферы FastDigest Green и FastDigest являются уникальными буферными растворами для гидролиза, обеспечивающие полную активность всех эндонуклеаз рестрикции FastDigest. Эта система позволяет выполнять двукратный и многократный гидролиз с любой комбинацией ферментов. Нет необходимости в последовательном гидролизе разными эндонуклеазами рестрикции или смене буфера. Обычные эндонуклеазы рестрикции могут иметь неспецифическую («звездную») активность из-за продолжительного времени инкубации, высокой концентрации фермента и (или) глицерина, высоких значений pH или низкой ионной силы. Ферменты FastDigest позволяют избежать этих недостатков и обеспечить проведение однократных или многократных гидролизов за 5 минут без сокращения специфичности.

Буфер FastDigest Green дает возможность прямого нанесения реакционной смеси непосредственно на гель, он содержит реагент плотности и два трекинговых красителя для отслеживания.

Ферменты, участвующие в модификации молекул ДНК/РНК, такие как лигазы, фосфатазы, киназы и ДНК-полимеразы, полностью активны в буферных растворах FastDigest и FastDigest Green. Поэтому, на последующих этапах, ферменты можно сразу добавлять в реакционную смесь FastDigest. Нет необходимости в замене буфера или проведении очистки реакционной смеси.

Когда необходимо варьировать условия реакции гидролиза ДНК/РНК, то в этом случае можно использовать обычные эндонуклеазы рестрикции имеющие широкий выбор реакционных буферов, разные оптимальные температуры гидролиза и инактивации, и различную чувствительность к метилированию.


Рис 1. Буфер FastDigest Green.


Рис.2. Гидролиз плазмидной ДНК эндонуклеазами
рестрикции FastDigest и обычными

Рис.3. Однократный, двукратный и трехкратный гидролиз плазмидной ДНК в буферном растворе

Реакционная смесь, содержащая буфер FastDigest Green Buffer:

  • Дорожка 1 — нанесена на гель, до электрофореза.
  • Дорожка 2 — разделена, после электрофореза.

Дорожки:

  • M — Маркер длин ДНК GeneRuler 1 kb Plus.
  • C — необработанная плазмидная ДНК.
  • 1 — гидролиз плазмидной ДНК в течении 5 мин. FastDigest XhoI.
  • 2 — гидролиз плазмидной ДНК в течении 5 мин. FastDigest ApaI.
  • 3 — двойной гидролиз плазмидной ДНК в течении 5 мин. FastDigest XhoI and FastDigest ApaI.
  • 4 — гидролиз плазмидной ДНК в течении 1 часа ApaI.
  • 5 — гидролиз плазмидной ДНК в течении 1 часа XhoI.
  • 6 — двойной гидролиз плазмидной ДНК в 1-кратном буфере Tango с 4-кратным избытком ApaI в течение 1 часа, и затем в 2-кратном буфере Tango с XhoI в течение еще 1 часа.

  • Дорожка М — маркер длины GeneRuler Express, Thermo FS.
  • Дорожка 1 — контрольный материал, нерасщепленная плазмидная ДНК.
  • Дорожка 2— FastDigest EcoRI.
  • Дорожка 3 — FastDigest EcoRI и FastDigest KpnI.
  • Дорожка 4 — FastDigest EcoRI, FastDigest KpnI и FastDigest SmaI.


Информация для заказа:

Пока нет данных. Перейти в каталог
B64
5х1 мл
хранение -30...-5°C
28 512
28 512 AMD

Универсальный буфер FastDigest является уникальным буферным раствором для гидролиза, который обеспечивает 100% активность всех эндонуклеаз рестрикции для ускоренного гидролиза ДНК FastDigest.

Буфер позволяет выполнять двукратный и многократный гидролиз ДНК с любой комбинацией ферментов. Нет необходимости в последовательном гидролизе разными эндонуклеазами рестрикции или смене буфера.

ДНК/РНК модифицирующие ферменты, такие как лигазы, фосфотазы, киназы и мезофильные ДНК-полимеразы также имеют 100% активность в буфере FastDigest. Таким образом, ферменты, используемые в последующих применениях, могут быть непосредственно добавлены в реакционную смесь.

Преимущества универсального буфера FastDigest:

  • обеспечивает быстрое однократное, двойное или многократное расщепление ДНК в течение 5-15 минут;
  • 100% активность всех эндонуклеаз рестрикции FastDigest;
  • 100% активность ДНК/РНК модифицирующих ферментов;
  • нет необходимости в промежуточных стадиях очистки ДНК;
  • исключает стадии последовательного гидролиза и замену буфера.


Концентрация

10x

Примечание

Хранение при 4 °C не более 6 месяцев.

Условия хранения

-20°С

B72
5х1 мл
24 624
24 624 AMD
Универсальный буфер FastDigest Green является уникальным буферным раствором для гидролиза, который обеспечивает 100% активность всех эндонуклеаз рестрикции для ускоренного гидролиза ДНК FastDigest.

Буфер позволяет выполнять двукратный и многократный гидролиз ДНК с любой комбинацией ферментов. Нет необходимости в последовательном гидролизе разными эндонуклеазами рестрикции или смене буфера.

ДНК/РНК модифицирующие ферменты, такие как лигазы, фосфотазы, киназы и мезофильные ДНК-полимеразы также имеют 100% активность в буфере FastDigest Green. Таким образом, ферменты, используемые в последующих применениях, могут быть непосредственно добавлены в реакционную смесь.

FastDigest Green содержит утяжеляющий раствор и трекинговые красители для прямого нанесения реакционной смеси на гель.

Для применений, требующих анализа продукта с помощью флуоресцентного возбуждения (например, измерения концентрации в УФ-свете), рекомендуется бесцветный FastDigest буфер.

Преимущества универсального буфера FastDigest Green:

  • обеспечивает быстрое однократное, двойное или многократное расщепление ДНК в течение 5-15 минут;
  • 100% активность всех эндонуклеаз рестрикции FastDigest;
  • 100% активность ДНК/РНК модифицирующих ферментов;
  • нет необходимости в промежуточных стадиях очистки ДНК;
  • исключает стадии последовательного гидролиза и замену буфера;
  • прямое нанесение реакционной смеси на гель.

Концентрация

10x

Примечание

Хранение при 4 °C не более 6 месяцев.

Условия хранения

-20 °С

См. также:


Ниже вы можете задать вопрос или оставить запрос в свободной форме

Ваш заказ будет обработан
в ближайшее время.
Мы пришлем уведомление, как только все будет готово. Спасибо!