4. Экстра-миксы – готовые смеси для ПЦР, Стар-лаб

Экстра-микс HS-Taq Color представляет собой 2-кратную реакционную смесь, содержащую все компоненты, необходимые для проведения ПЦР (исключая ДНК-матрицу и праймеры):

• высокопроцессивную рекомбинантную HS-Taq ДНК-полимеразу с "горячим" стартом;
• смесь дезоксинуклеозидтрифосфатов;
• ПЦР-буфер;
• Mg^2+;
• красители.

Экстра-микс оптимизирован для проведения эффективной и воспроизводимой ПЦР c “горячим” стартом; он химически стабилен, инертен и не меняет оптимальной температуры отжига праймеров или характеристик плавления матрицы. В его состав входят добавки, повышающие время полужизни и процессивность HS-Taq ДНК-полимеразы за счет повышения её стабильности во время ПЦР.

Увеличивающие плотность пробы компоненты и красители позволяют наносить реакционную смесь сразу на гель после амплификации для удобства работы с ней.
Форма реагентов для проведения ПЦР в виде экстра-микса экономит время и снижает вероятность контаминации за счет малого числа шагов пипетирования.
HS-Taq ДНК-полимераза, входящая в состав экстра-микса, неактивна при температуре ниже +70^оС. Для её активации необходим прогрев реакционной смеси при +95 °С в течение 5 мин. Рекомбинантная HS-Taq ДНК-полимераза обладает 5´-3´ ДНК-зависимой полимеразной активностью и 5’-3’ экзонуклеазной активностью нативной Taq ДНК-полимеразы из Thermus aquaticus. Скорость продвижения Taq ДНК-полимеразы зависит от сложности ДНК-матрицы и составляет примерно 1 т.п.н./мин. Рекомбинантная HS-Taq ДНК-полимераза идеально подходит для стандартной ПЦР с матрицы до 5 т.п.н.; она обладает способностью присоединять адениновый остаток к 3’-концу синтезируемой цепи, поэтому продукты ПЦР могут использоваться для ТА-клонирования.

Кроме экстра-микса, в состав набора также включены 50 мМ MgCl₂ и стерильная вода. Входящий в набор раствор MgCl₂ позволяет легко оптимизировать реакционную смесь под конкретную систему "матрица-праймеры".

Состав набора

Кат. №	Кол-во реакций по 50 мкл	HS-Taq Color (2х)	50 мМ MgCl2	Вода
1961.0200	200	4 х 1.25 мл	1 х 1 мл	4 х 1.25 мл
1961.1020	1020	17 х 1.5 мл	2 х 1.8 мл

Состав экстра-микса HS-Taq Color (2х):

• 100 мM Трис-НCl, рН 8.5 (при 25 °С);
• 100 мM KCl;
• 0,4 мМ каждого дезоксинуклеозидтрифосфата;
• 4 мМ MgCl₂;
• 0,06 ед. акт./мкл HS-Taq ДНК-полимеразы;
• 0,2% Tween 20;
• стабилизаторы HS-Taq ДНК-полимеразы;
• красители.

Преимущества использования экстра-микса HS-Taq Color с Taq-полимеразой с "горячим" стартом:

• Фермент с “горячим” стартом повышает специфичность, чувствительность и выход реакции.
• Для активации HS-Taq ДНК-полимеразы требуется не более 5 мин.
• Сокращается время на подготовку реакции.
• Снижается вероятность контаминации при смешивании компонентов ПЦР.
• Стандартизируются условия постановки однотипных реакций (снижается погрешность при смешивании компонентов ПЦР в разных экспериментах).
• Возможно использование в широком спектре видов ПЦР.
• Возможность ТА клонирования продуктов ПЦР за счет выступающих на концах амплифицированных фрагментов ДНК дезоксиаденозиновых остатков.
• Удобство нанесения проб на гель после амплификации благодаря высокой плотности смеси и наличию красителя

Область применения:

• ПЦР с “горячим” стартом.
• Высокопроизводительная ПЦР.
• Обычная ПЦР с высокой воспроизводимостью.
• Наработка ПЦР-продуктов для ТА клонирования.
• ОТ-ПЦР.

Ограничения к использованию:

• Не рекомендуется использовать для ампликонов длиной свыше 5 т.п.о.
• Из-за содержания красителя не рекомендуется использовать для ПЦР в режиме реального времени и других приложений, требующих измерения оптической плотности или флуоресценции пробы. Для таких приложений рекомендуется использовать смеси HS-qPCR или HS-qPCR SYBR Blue.

Ингибирование и инактивация
Ингибиторы: ионные детергенты (дезоксихолат натрия, саркозил и додецилсульфат натрия (SDS) в концентрациях выше, чем 0,06, 0,02 и 0,01%, соответственно).
Инактивируется экстракцией смесью фенол/хлороформ.

Срок хранения и транспортировка:
1 год при -20 °С; не более 50 циклов замораживания-размораживания.

1961_Экстра-микс для ПЦР HS-Taq Color, инструкция, Стар-лаб, русск., 6 стр.

Экстра-микс HS-Taq представляет собой 2-кратную реакционную смесь, содержащую все компоненты, необходимые для проведения ПЦР (исключая ДНК-матрицу и праймеры):

• высокопроцессивную рекомбинантную HS-Taq ДНК-полимеразу с «горячим» стартом,
• смесь дезоксинуклеозидтрифосфатов,
• ПЦР-буфер,
• Mg²⁺.

Экстра-микс оптимизирован для проведения эффективной и воспроизводимой ПЦР c "горячим стартом"; он химически стабилен, инертен и не меняет оптимальной температуры отжига праймеров или характеристик плавления матрицы. В его состав входят добавки, повышающие время полужизни и процессивность HS-Taq ДНК-полимеразы за счет повышения её стабильности во время ПЦР, и компоненты, увеличивающие плотность пробы для удобства работы с ней. Форма реагентов для проведения ПЦР в виде экстра-микса экономит время и снижает вероятность контаминации за счет малого числа шагов пипетирования.

Экстра-микс HS-Taq не содержит веществ, мешающих проведению оптического контроля за ходом реакции по изменению флюоресценции пробы.

HS-Taq ДНК-полимераза, входящая в состав экстра-микса, неактивна при температуре ниже +70^оС. Для её активации необходим прогрев реакционной смеси при +95°С в течение 5 мин. Рекомбинантная HS-Taq ДНК-полимераза обладает 5´-3´ ДНК-зависимой полимеразной активностью и 5’-3’ экзонуклеазной активностью нативной Taq ДНК-полимеразы из Thermus aquaticus. Скорость продвижения Taq ДНК-полимеразы зависит от сложности ДНК-матрицы и составляет примерно 1 т.п.н./мин. Рекомбинантная HS-Taq ДНК-полимераза идеально подходит для стандартной ПЦР с матрицы до 5 т.п.н.; она обладает способностью присоединять адениновый остаток к 3’-концу синтезируемой цепи, поэтому продукты ПЦР могут использоваться для ТА-клонирования.

Кроме экстра-микса, в состав набора также включены 50 мМ MgCl₂ и стерильная вода. Входящий в набор раствор MgCl₂ позволяет легко оптимизировать реакционную смесь под конкретную систему "матрица-праймеры".

Состав набора

Кат. №	Кол-во реакций по 50 мкл	HS-Taq (2х)	50 мМ MgCl2	Вода	6× буфер для нанесения на гель
1960.0200	200	4 х 1.25 мл	1 х 1 мл	4 х 1.25 мл	1 х 1 мл
1960.1020	1020	17 х 1.5 мл	2 х 1.8 мл		1 х 1.8 мл

Состав экстра-микса HS-Taq (2х):

• 100 мM Трис-НCl, рН 8.5 (при 25 °С);
• 100 мM KCl;
• 0,4 мМ каждого дезоксинуклеозидтрифосфата;
• 4 мМ MgCl_2;
• 0,06 ед. акт./мкл HS-Taq ДНК-полимеразы;
• 0,2% Tween 20;
• стабилизаторы HS-Taq ДНК-полимеразы.

Преимущества использования экстра-микса с Taq-полимеразой с "горячим" стартом:

• Фермент с “горячим” стартом повышает специфичность, чувствительность и выход реакции.
• Для активации HS-Taq ДНК-полимеразы требуется не более 5 мин.
• Сокращается время на подготовку реакции.
• Снижается вероятность контаминации при смешивании компонентов ПЦР.
• Стандартизируются условия постановки однотипных реакций (снижается погрешность при смешивании компонентов ПЦР в разных экспериментах).
• Возможно использование в широком спектре видов ПЦР.
• Возможность ТА клонирования продуктов ПЦР за счет выступающих на концах амплифицированных фрагментов ДНК дезоксиаденозиновых остатков.

Область применения:

• ПЦР с "горячим" стартом.
• Высокопроизводительная ПЦР.
• Обычная ПЦР с высокой воспроизводимостью.
• Наработка ПЦР-продуктов для ТА-клонирования.
• Вторая стадия ОТ-ПЦР.

Ограничения к использованию:

• Не рекомендуется использовать для ампликонов длиной свыше 5 т.п.н.
  

Ингибирование и инактивация
Ингибиторы: ионные детергенты (дезоксихолат натрия, саркозил и додецилсульфат натрия (SDS) в концентрациях выше, чем 0,06, 0,02 и 0,01%, соответственно).
Инактивируется экстракцией смесью фенол/хлороформ.

Срок хранения и транспортировка: 1 год при -20 °С; не более 50 циклов замораживания- размораживания.

1960_Экстра-микс для ПЦР HS-Taq, инструкция, Стар-лаб, русск., 5 стр.

Область применения: ПЦР c “горячим” стартом в режиме реального времени с применением олигонуклеотидных зондов, обычная ПЦР, высоковоспроизводимая ПЦР,
генотипирование; для амплификаторов, обеспечивающих нормализацию сигнала по пассивному референсному красителю ROX: Thermo Life Technologies (ABI) 7500, 7500.

Экстра-микс HS-qPCR SYBR Blue предназначен для проведения количественной ПЦР в режиме реального времени с использованием флуоресцентного красителя SYBR Green I и представляет собой 2-кратную реакционную смесь, содержащую все компоненты, необходимые для проведения ПЦР в режиме реального времени (исключая ДНК-матрицу и праймеры):

• высокопроцессивную рекомбинантную HS-Taq ДНК-полимеразу с "горячим" стартом,
• смесь дезоксинуклеозидтрифосфатов,
• ПЦР-буфер,
• Mg²⁺ (3 мМ),
• интеркалирующий краситель SYBR Green I
• инертный краситель

Экстра-микс HS-qPCR SYBR Blue оптимизирован для проведения количественной ПЦР в режиме реального времени. В его состав входят добавки, повышающие время полужизни и процессивность HS-Taq ДНК-полимеразы за счет повышения её стабильности во время ПЦР, а также вещества, влияющие на температуру отжига праймеров и характеристики плавления матрицы, что позволяет повысить специфичность ПЦР и использовать матрицы со сложной пространственной структурой. Инертный краситель в составе Экстра-микса HS-qPCR SYBR Blue окрашивает его в голубой цвет (максимум поглощения – 615 нм) и облегчает контроль за раскапыванием смеси при использовании многолуночных планшетов.

SYBR Green I - флуоресцентный интеркалирующий краситель для количественной и качественной детекции продуктов в ходе ПЦР в режиме реального времени. SYBR Green I обеспечивает простой и экономичный вариант для детекции и количественного определения ПЦР-продуктов без необходимости использования специфичных флуоресцентных зондов. В ходе амплификации краситель SYBR Green I встраивается в малую бороздку ДНК ПЦР-продуктов и испускает более сильный по сравнению с несвязанным красителем флуоресцентный сигнал. Максимумы поглощения и испускания SYBR Green I - 494 нм и 521 нм соответственно, что позволяет использовать его со всеми известными на сегодняшний день амплификаторами для проведения ПЦР в режиме реального времени.

HS-Taq ДНК-полимераза, входящая в состав экстра-микса, неактивна при комнатной температуре. Для её активации необходим прогрев реакционной смеси при 95 °С в течение 5 мин. П Рекомбинантная HS-Taq ДНК-полимераза обладает 5´-3´ ДНК-зависимой полимеразной активностью и 5’-3’ экзонуклеазной активностью нативной Taq ДНК-полимеразы из Thermus aquaticus. Скорость продвижения Taq ДНК-полимеразы зависит от сложности ДНК-матрицы и составляет примерно 1 т.п.н./мин. Рекомбинантная HS-Taq ДНК-полимераза идеально подходит для стандартной ПЦР с матрицы до 5 т.п.н.

Кроме экстра-микса, в состав набора также включены 50 мМ MgCl_₂ и стерильная вода. Входящий в набор раствор MgCl_₂ позволяет легко оптимизировать реакционную смесь под конкретную систему "матрица-праймеры". Форма реагентов для проведения ПЦР в виде экстра-микса экономит время и снижает вероятность контаминации за счет малого числа шагов пипетирования.

Состав Экстра-микса HS-qPCR SYBR Blue:

• 100 мM Трис-НCl, рН 8.5 (при 25 °С);
• 100 мM KCl;
• 0,4 мМ каждого дезоксинуклеозидтрифосфата;
• 3 мМ MgC₂;
• 0,06 ед. акт./мкл Taq ДНК-полимеразы;
• 0,025 % Tween 20;
• стабилизаторы HS-Taq ДНК-полимеразы;
• SYBR Green I;
• инертный краситель.

Состав набора

Кат. №	Кол-во реакций по 50 мкл	HS-Taq qPCR SYBR Blue(2х)	50 мМ MgCl₂	Вода
1974.0200	200	4 х 1,25 мл	1 х 1 мл	4 х 1,25 мл
1974.1020	1020	17 х 1,5 мл	2 х 1,8 мл

Преимущества использования экстра-микса:

• Фермент с “горячим” стартом повышает специфичность, чувствительность и выход реакции.
• Для активации HS-Taq ДНК-полимеразы требуется не более 5 мин.
• Сокращается время на подготовку реакции.
• Снижается вероятность контаминации при смешивании компонентов ПЦР.
• Стандартизируются условия постановки однотипных реакций (снижается погрешность при смешивании компонентов ПЦР в разных экспериментах).
• Инертный краситель облегчает пробоподготовку при постановке ПЦР.

Область применения:

• ПЦР в режиме реального времени с использованием интеркалирующего красителя SYBR Green I.
• Обычная ПЦР.

Ограничения к использованию:
Не рекомендуется использовать для ПЦР в реальном времени с флуоресцентно-меченными зондами. Для таких приложений следует использовать Экстра-микс HS-qPCR (2×).

Срок хранения и транспортировка:
1 год при -20 °С; не более 50 циклов замораживания-размораживания.

1974_Экстра-микс для кол ПЦР HS-qPCR SYBR Blue, инструкция, Стар-лаб, русск., 3 стр.

Область применения: синтез первой цепи кДНК для ОТ-ПЦР и ОТ-ПЦР в режиме реального времени, синтез кДНК для клонирования, получение меченых кДНК-зондов для микрочипов (microarray), мечение ДНК, анализ РНК с помощью праймер-экстеншн.

Набор реактивов для ПЦР с Taq-полимеразой Hot Start (+MgCl₂) содержит рекомбинантную HS-Taq ДНК-полимеразу и растворы всех необходимых компонентов для проведения стандартной ПЦР c “горячим” стартом (за исключением матрицы ДНК и праймеров). ПЦР-буфер, входящий в состав набора, уже содержит MgCl₂ в концентрации 10 мМ, достаточной для постановки большинства рутинных ПЦР.

HS-Taq ДНК-полимераза представляет собой рекомбинантную Taq ДНК-полимеразу, инактивированную специфическими моноклональными антителами. HS-Taq ДНК-полимераза не активна при температуре до +70 °С. Это позволяет избежать образования неспецифических продуктов и праймер-димеров при низкой температуре на стадии смешивания компонентов ПЦР-смеси. Активация осуществляется на первом цикле ПЦР путём инкубации в течение 5 мин при +95 °С. Рекомбинантная Taq ДНК-полимераза обладает 5´-3´ ДНК-зависимой полимеразной активностью и 5’-3’ экзонуклеазной активностью нативной Taq ДНК-полимеразы из Thermus aquaticus. Скорость продвижения Taq ДНК-полимеразы зависит от сложности ДНК-матрицы и составляет примерно 1 т.п.н./мин. HS-Taq ДНК-полимераза идеально подходит для стандартной ПЦР с матрицы до 5 т.п.н.; она обладает способностью присоединять адениновый остаток к 3’-концу синтезируемой цепи, поэтому продукты ПЦР могут использоваться для ТА-клонирования.

5× ПЦР-буфер (+MgCl₂) оптимизирован для проведения эффективной и воспроизводимой ПЦР. В состав буфера входят MgCl₂ (10 мМ) и добавки, повышающие время полужизни и процессивность HS-Taq ДНК-полимеразы за счет повышения её стабильности во время ПЦР. Буфер химически стабилен, инертен и не меняет оптимальной температуры отжига праймеров или характеристики плавления матрицы. Входящие в набор 50 мМ раствор MgCl₂ и 50× смесь dNTP позволяют легко оптимизировать реакционную смесь под конкретную систему «матрица-праймеры», а 6× Буфер для нанесения на гель облегчает пробоподготовку для электрофореза ПЦР-продуктов и контроль над ходом электрофореза.

Состав набора

Кат. #	HS-Taq DNA-полимераза, 5 ед. акт./мкл*	5× ПЦР буфер (+MgCl2)	50 мМ MgCl2	50× смесь dNTP (10 мМ каждого)	6×буфер для нанесения на гель	Кол-во, ед. акт.
1958.0500	1 × 100 мкл	2 × 1.5 мл	1 × 1 мл	2 × 200 мкл	1 × 1.5 мл	500
1958.2250	3 × 150 мкл	8 × 1.5 мл	2 × 1 мл	4 × 400 мкл	3 × 1.5 мл	2250

* За единицу активности принимали количество фермента, катализирующее включение 10 нмоль dNTP в кислотонерастворимый продукт за 30 мин при 74 °С. Условия реакции: 50 мМ Трис-HCl, pH 9.0 (при 25 °С), 50 мМ NaCl, 10 мМ MgCl₂, 200 мM dATP, 200 мM dCTP, 200 мM dGTP, 50 мM [³H] dTTP, 0,25 мг/мл активированной ДНК из тимуса теленка.

Буфер для хранения HS-Taq ДНК-полимеразы:
50 мМ Трис-HCl, pH 8.0 (при 25 °С), 50 мМ NaCl, 0.1 мМ ЭДТА, 1мМ дитиотреитол, 50% (v/v) глицерин и 1% (v/v) Тритон Х-100.

5× ПЦР буфер (+MgCl₂):
50 мM Трис-НCl, рН 8.5 (при 25 °С), 250 мM KCl, 10 мМ MgCl₂, 0.5% (v/v) Tween 20, стабилизаторы Taq ДНК-полимеразы.

Область применения:
ПЦР с “горячим” стартом.
Высокопроизводительная ПЦР.
Обычная ПЦР с высокой воспроизводимостью.
Наработка ПЦР-продуктов для ТА клонирования.
Вторая стадия ОТ-ПЦР.

Ограничения к использованию:

• Не рекомендуется использовать для ампликонов длиной свыше 5 тыс. п.н.
  

Ингибирование и инактивация
Ингибиторы: ионные детергенты (дезоксихолат натрия, саркозил и додецилсульфат натрия (SDS) в концентрациях выше, чем 0,06, 0,02 и 0,01%, соответственно).
Инактивируется экстракцией смесью фенол/хлороформ.

Хранение и транспортировка: при -20 °С; не более 50 циклов замораживания-размораживания.

Срок хранения: при соблюдении условий хранения и транспортировки 1 год.

1958_ Набор реактивов для ПЦР с Taq-полимеразой и 10 мМ MgCl2, инструкция, Стар-лаб, русск., 4 стр.

Набор реактивов для ПЦР с Taq-ДНК-полимеразой Hot Start содержит рекомбинантную HS-Taq ДНК-полимеразу и растворы всех необходимых компонентов для проведения стандартной ПЦР c "горячим" стартом (за исключением матрицы ДНК и праймеров). В состав набора входят: раствор HS-Taq ДНК-полимеразы (5 ед. акт./мкл), 5× ПЦР буфер, 50 мМ MgCl₂, 50× смесь dNTP и 6× буфер для нанесения на гель. Все реагенты высокого качества и оптимизированы для проведения ПЦР.

HS-Taq ДНК-полимераза представляет собой рекомбинантную Taq ДНК-полимеразу, инактивированную специфическими моноклональными антителами. HS-Taq ДНК-полимераза неактивна при температуре до +70 °С. Это позволяет избежать образования неспецифических продуктов и праймер-димеров при низкой температуре на стадии смешивания компонентов ПЦР-смеси. Активация осуществляется на первом цикле ПЦР путём 5-минутной инкубации при +95 °С. Рекомбинантная Taq ДНК-полимераза обладает 5´-3´ ДНК-зависимой полимеразной активностью и 5´-3´ экзонуклеазной активностью нативной Taq ДНК-полимеразы из Thermus aquaticus. Скорость продвижения Taq ДНК-полимеразы зависит от сложности ДНК-матрицы и составляет примерно 1 т.п.н./мин. Рекомбинантная HS-Taq ДНК-полимераза идеально подходит для стандартной ПЦР с матрицы до 5 т.п.н. и обладает способностью присоединять адениновый остаток к 3’-концу синтезируемой цепи ДНК, поэтому ПЦР-фрагменты пригодны для ТА-клонирования.

5× ПЦР-буфер оптимизирован для проведения эффективной и воспроизводимой ПЦР (не содержит MgCl₂). В состав буфера входят добавки, повышающие время полужизни и процессивность HS-Taq ДНК-полимеразы за счет повышения её стабильности во время ПЦР. Буфер химически стабилен, инертен и не меняет оптимальной температуры отжига праймеров или характеристики плавления матрицы. Входящие в набор 50 мМ раствор MgCl₂ и 50× смесь dNTP позволяют легко оптимизировать реакционную смесь под конкретную систему «матрица-праймеры», а 6× Буфер для нанесения на гель облегчает пробоподготовку для электрофореза ПЦР-продуктов и контроль над ходом электрофореза.

Состав набора

Кат. #	HS-Taq ДНК-полимераза, 5 ед. акт./мкл*	5× ПЦР-буфер	50 мМ MgCl2	50× смесь dNTP (10 мМ каждого)	6× буфер для нанесения на гель	Кол-во, ед. акт.
1957.0500	1 × 100 мкл	2 × 1,5 мл	1 × 1 мл	2 × 200 мкл	1 × 1,75 мл	500
1957.2250	3 × 150 мкл	8 × 1,5 мл	2 × 1 мл	4 × 400 мкл	3 × 1.75 мл	2250

* За единицу активности принимали количество фермента, катализирующее включение 10 нмоль dNTP в кислотонерастворимый продукт за 30 мин при 74 °С.Условия реакции:50 мМ Трис-HCl, pH 9.0 (при 25 °С), 50 мМ NaCl, 10 мМ MgCl₂, 200 мM dATP, 200 мM dCTP, 200 мM dGTP, 50 мM [³H] dTTP, 0.25 мг/мл активированной ДНК из тимуса теленка.

Буфер для хранения HS-Taq ДНК-полимеразы:
50 мМ Трис-HCl, pH 8.0 (при 25 °С), 50 мМ NaCl, 0,1 мМ ЭДТА, 1мМ дитиотреитол, 50% (v/v) глицерин и 1% (v/v) Тритон Х-100.

5× ПЦР-буфер:
50 мM Трис-НCl, рН 8.5 (при 25 °С), 250 мM KCl, 0.5% (v/v) Tween 20, стабилизаторы Taq ДНК-полимеразы.

Область применения:

• ПЦР с “горячим” стартом.
• Высокопроизводительная ПЦР.
• Обычная ПЦР с высокой воспроизводимостью.
• Наработка ПЦР-продуктов для ТА-клонирования.
• Вторая стадия ОТ-ПЦР.

Ограничения к использованию:

• Не рекомендуется использовать для ампликонов длиной свыше 5 т.п.н.
  

Ингибирование и инактивация
Ингибиторы: ионные детергенты (дезоксихолат натрия, саркозил и додецилсульфат натрия (SDS) в концентрациях выше, чем 0,06, 0,02 и 0,01%, соответственно).
Инактивируется экстракцией смесью фенол/хлороформ.

Хранение и транспортировка: при -20°С; не более 50 циклов замораживания-размораживания.

Срок хранения: при соблюдении условий хранения и транспортировки 1 год.

1957_ Набор реактивов для ПЦР с Taq-полимеразой Hot Start, инструкция, Стар-лаб, русск., 4 стр.

Набор реактивов для обратной транкрипции с MMLV–RH представляет собой полную систему для эффективного синтеза первой цепи кДНК с использованием в качестве матрицы мРНК или суммарной РНК. Набор содержит все необходимые компоненты для проведения обратной транскрипции: обратную транскриптазу MMLV–RH, два варианта 5× ОТ-буфера, смесь dNTP, раствор ДТТ, растворы олиго(dT)₁₆ праймера и случайного гексапраймера, а также свободную от РНКаз воду.

MMLV–RH – генетически модифицированная обратная транскриптаза (ревертаза) вируса лейкемии мышей (M-MuLV). Она отличается от обратной транскриптазы MMLV дикого типа структурой, каталитическими свойствами и температурным оптимумом активности. Фермент проявляет РНК- и ДНК-зависимую полимеразную активность, но лишен активности РНКазы Н. MMLV–RH проявляет оптимальную активность при +42°С (активна до +50°С). Фермент способен синтезировать первую цепь кДНК длиной до 10 т.н. и включать модифицированные основания.

Кроме обратной транскриптазы, набор содержит два типа буфера на основе KCl и (NH₄)₂SO₄, оптимизированные для проведения эффективной реакции обратной транскрипции с любых матриц РНК, в том числе содержащих участки повышенной сложности (сильно структурированные или GC-богатые).

Олиго(dT)₁₆ праймер и случайный гексапраймер позволяют более узконаправленно подходить к обратной транскрипции интересующих типов или участков РНК. Случайный гексапраймер неспецифически связывается с РНК-матрицей и используется для синтеза кДНК со всех типов РНК в составе суммарной РНК. Олиго(dT)₁₆ праймер селективно отжигается на полиадениновых последовательностях РНК, обеспечивая синтез кДНК только с мРНК, содержащих поли(А)-3’-конец. Также можно использовать специфичные праймеры для синтеза определённой последовательности.

Состав набора

Компонент	Кат. #
	1967.0050	1959.0250
MMLV-RH ревертаза, 100 ед. акт./ мкл*	1 × 50 мкл (5000 ед.акт.)	2 × 250 мкл (25000 ед.акт.)
5× ОТ-буфер (KCl)	1 × 220 мкл	3 × 400 мкл
5× ОТ-буфер ((NH4)2SO4)	1 × 220 мкл	3 × 400 мкл
20× смесь dNTP (10 мМ каждого)	1 × 120 мкл	2 × 300 мкл
Дитиотреитол	1 × 110 мкл	2 × 260 мкл
Случайный гексапраймер, 20 мкМ	1 × 50 мкл	1 × 260 мкл
Олиго(dT) праймер, 20 мкМ	1 × 50 мкл	1 × 260 мкл
Вода, обработанная ДЭПК	3 × 600 мкл	5 × 1.8 мл

* За единицу активности принимали количество фермента, катализирующее включение 1 нмоль dTMP в кислотонерастворимый продукт за 10 мин при +37 °С.

1967_Набор реактивов для обратной транскрипции с MMLV, инструкция, Стар-лаб, русск., стр. 3

Набор реактивов для ПЦР с Taq-полимеразой Hot Start расширенный содержит рекомбинантную HS-Taq ДНК-полимеразу, три реакционных буфера (10× ПЦР буфер, 5× Green буфер и 5× GC буфер), а также другие компоненты, необходимые для проведения ПЦР (за исключением матрицы ДНК и праймеров).

HS-Taq ДНК-полимераза представляет собой рекомбинантную Taq ДНК-полимеразу, инактивированную специфическими моноклональными антителами. HS-Taq ДНК-полимераза неактивна при температуре до +70 °С. Это позволяет избежать образования неспецифических продуктов и праймер-димеров при низкой температуре на стадии смешивания компонентов ПЦР-смеси. Активация осуществляется на первом цикле ПЦР путём инкубации в течение 5 мин при +95 °С. Рекомбинантная Taq ДНК-полимераза обладает 5´-3´ ДНК-зависимой полимеразной активностью и 5’-3’ экзонуклеазной активностью нативной Taq ДНК-полимеразы из Thermus aquaticus. Скорость продвижения Taq ДНК-полимеразы зависит от сложности ДНК-матрицы и составляет примерно 1 т.п.н./мин. Рекомбинантная HS-Taq ДНК-полимераза идеально подходит для стандартной ПЦР с матрицы до 5 т.п.н.; она обладает способностью присоединять адениновый остаток к 3’-концу синтезируемой цепи, поэтому продукты ПЦР могут использоваться для ТА-клонирования.

10× ПЦР буфер оптимизирован для проведения большинства видов ПЦР, в том числе для проведения ПЦР в режиме реального времени с интеркалирующими красителями или флуоресцентными зондами. Буфер химически стабилен, инертен и не меняет оптимальной температуры отжига праймеров или характеристики плавления матрицы.

5× Green буфер содержит маркерные красители (сине-зелёный и желтый) и добавки, увеличивающие плотность раствора, для удобного нанесения на гель. Предназначен для стандартной ПЦР с оценкой выхода продуктов по конечной точке (методом разделения продуктов в геле). Буфер химически стабилен, инертен и не меняет оптимальной температуры отжига праймеров или характеристики плавления матрицы.

5× GC буфер предназначен для амплификации участков ДНК, богатых GC и/или имеющих сложную пространственную структуру. Буфер химически стабилен, содержит вещества, меняющие температуру отжига праймеров и характеристики плавления матрицы.

В состав всех буферов входят добавки, повышающие время полужизни и процессивность Taq ДНК-полимеразы за счет повышения её стабильности во время ПЦР. Все буферы в условиях разбавления до 1× (однократного) содержат 1,5 мМ MgCl₂. Входящие в набор 50 мМ раствор MgCl₂ и 50× смесь dNTP позволяют легко оптимизировать реакционную смесь под конкретную систему "матрица-праймеры". 6× Буфер для нанесения на гель облегчает пробоподготовку для электрофореза ПЦР-продуктов и контроль над ходом электрофореза.

Состав набора

Компонент	Кат. #
	1959.0500	1959.2500
HS-Taq DNA-полимераза, 5 ед. акт./ мкл*	1 × 100 мкл	2 × 250 мкл
10× ПЦР буфер	1 × 1.5 мл	3 × 1.8 мл
5× Green буфер	2 × 1.5 мл	5 × 1.8 мл
5× GC буфер	2 × 1.5 мл	5 × 1.8 мл
50 мМ MgCl2	1 × 1 мл	2 × 1 мл
50× смесь dNTP (10 мМ каждого)	2 × 200 мкл	2 × 800 мкл
6× буфер для нанесения на гель	1 × 1 мл	1 × 1.8 мл

* За единицу активности принимали количество фермента, катализирующее включение 10 нмоль dNTP в кислотонерастворимый продукт за 30 мин при 74 °С. Условия реакции:50 мМ Трис-HCl, pH 9.0 (при 25 °С), 50 мМ NaCl, 10 мМ MgCl₂, 200 мM dATP, 200 мM dCTP, 200 мM dGTP, 50 мM [³H] dTTP, 0,25 мг/мл активированной ДНК из тимуса теленка.

Буфер для хранения HS-Taq ДНК-полимеразы:
50 мМ Трис-HCl, pH 8.0 (при 25 °С), 50 мМ NaCl, 0.1 мМ ЭДТА, 1мМ дитиотреитол, 50% (v/v) глицерин и 1% (v/v) Тритон Х-100.

10× ПЦР буфер:
100 мM Трис-HCl, рН 8.5 (при 25 °С), 500 мM KCl, 15 мM MgCl₂, 0.5% (v/v) Tween 20, стабилизаторы Taq ДНК-полимеразы.

5× Green буфер:
50 мM Трис-НCl, рН 8.5 (при 25 °С), 250 мM KCl, 7,5 мМ MgCl₂, 0.5% (v/v) Tween 20, стабилизаторы Taq ДНК-полимеразы, маркерные красители.

5× GC буфер:
100 мM Трис-НCl, рН 8.5 (при 25 °С), 250 мM KCl, 7.5 мМ MgCl₂, 0.5% (v/v) Tween 20, ДМСО, стабилизаторы Taq ДНК-полимеразы.

Область применения:

• ПЦР с “горячим” стартом.
• Высокопроизводительная ПЦР.
• Обычная ПЦР с высокой воспроизводимостью.
• Наработка ПЦР-продуктов для ТА клонирования.
• Вторая стадия ОТ-ПЦР.
• ПЦР GC-богатых и сложно-структурированных участков ДНК.

Ограничения к использованию

• Не рекомендуется использовать для ампликонов длиной свыше 5 тыс. п.н.
  

Ингибирование и инактивация
Ингибиторы: ионные детергенты (дезоксихолат натрия, саркозил и додецилсульфат натрия (SDS) в концентрациях выше, чем 0,06, 0,02 и 0,01%, соответственно).
Инактивируется экстракцией смесью фенол/хлороформ.

Хранение и транспортировка: при -20 °С; не более 50 циклов замораживания-размораживания.

Срок хранения: при соблюдении условий хранения и транспортировки 1 год.

1959_Набор реактивов для ПЦР с Taq-полимеразой расширенный, инструкция, Стар-лаб, русск., 4 стр.

Рекомбинантная форма, выделенная из E. coli, не содержит доменa РНКазы Н Буфер хранения: 50 мМ трис-HCl, pH 8,0 (при 25°C ), 100 мМ NaCl, 1 мМ ЭДТА, 5 мМ дитиотрейтол, 50 % глицерин и 0,1 % NP-40. Условия определения активности: 50 мМ трис-HCl, pH 8,3 (при 25°С), 40 мМ KCl, 6 мМ KCl, 50 мM [3H] dTTP, 1 мМ дитиотрейтол, poly А 2 А260/мл, 2 мкМ d(pT)12, 100 мкг/мл БСА. Определение активности: За единицу активности принимали количество фермента, катализирующее включение 1 нмоль dTMP в кислотонерастворимый продукт за 10 мин при 37°С. Хранение и транспортировка: -20°С

Рекомбинантная форма, выделенная из E. coli

Буфер хранения:
50 мМ Трис-HCl, pH 8,0 (при 25°С), 50 мМ NaCl, 0,1 мМ ЭДТА, 1 мМ дитиотрейтол, 50 % глицерин и 1 % Тритон Х-100.

Определение единицы активности:
За единицу активности принимали количество фермента, катализирующее включение 10 нмоль dNTP в кислотонерастворимый продукт за 30 мин при 74°С.

Условия реакции:
50 мМ трис-HCl, pH 9,0 (при 25° С), 50 мМ NaCl, 10 мМ MgCl₂, 200 мM dATP, 200 мM dCTP, 200 мM dGTP, 50 мM [3H] dTTP, 0,25 мг/мл активированной ДНК из тимуса теленка.

Хранение и транспортировка:
-20°С

100 мМ раствор аммонийной соли в стерильной воде, либо в ТЕ-буфере.
Чистота препарата — не менее 99 % (по ВЭЖХ).

100 мМ раствор аммонийной соли в стерильной воде, либо в ТЕ-буфере.
Чистота препарата — не менее 99 % (по ВЭЖХ).

100 мМ раствор аммонийной соли в стерильной воде, либо в ТЕ-буфере.
Чистота препарата — не менее 99 % (по ВЭЖХ).

Каждый нуклеозид-5’-трифосфаты поставляется в отдельной пробирке, свободен от примесей эндо-, экзонуклеаз, рибонуклеаз, фосфатаз, следовых количеств ДНК и нуклеотидов, протестирован in vitro.

Условия хранения: -20 °С, допускается многократное размораживание или замораживание.

Каждый нуклеозид-5’-трифосфаты поставляется в отдельной пробирке, свободен от примесей эндо-, экзонуклеаз, рибонуклеаз, фосфатаз, следовых количеств ДНК и нуклеотидов, протестирован in vitro.

Условия хранения: -20 °С, допускается многократное размораживание или замораживание.

100 мМ раствор аммонийной соли в стерильной воде, либо в ТЕ-буфере.
Чистота препарата — не менее 99 % (по ВЭЖХ).

100 мМ раствор аммонийной соли в стерильной воде, либо в ТЕ-буфере.
Чистота препарата — не менее 99 % (по ВЭЖХ).

100 мМ раствор аммонийной соли в стерильной воде, либо в ТЕ-буфере.
Чистота препарата — не менее 99 % (по ВЭЖХ).

100 мМ раствор аммонийной соли в стерильной воде, либо в ТЕ-буфере.
Чистота препарата — не менее 99 % (по ВЭЖХ).

Поставляются в виде 100 мМ раствора в ТЕ-буфере ( 0,01М Трис-HCI, 0,01М ЭДТА, рН=7,8), как наборами по 4 нуклеотида, так и по отдельности, нуклеотиды очищены ионнообменной колоночной хроматографией.

Условия хранения: -20 °С, допускается транспортировка в температуре окружающей среды.

Поставляются в виде 100 мМ раствора в ТЕ-буфере ( 0,01М Трис-HCI, 0,01М ЭДТА, рН=7,8), как наборами по 4 нуклеотида, так и по отдельности, нуклеотиды очищены ионнообменной колоночной хроматографией.

Условия хранения: -20 °С, допускается транспортировка в температуре окружающей среды.

Поставляются в виде 100 мМ раствора в воде как наборами по 4 нуклеотида, так и по отдельности, нуклеотиды очищены ионнообменной колоночной хроматографией.

Условия хранения: -20 °С, допускается транспортировка в температуре окружающей среды.

Реагент для введения флуоресцентной метки в ДНК.

Условия хранения: -20 °С.

Терминирующий трифосфат, аналог трифосфатов на основе 2',3'-дидезоксинуклеозидов.

Условия хранения: -20 °С.

Терминирующий трифосфат, аналог трифосфатов на основе 2',3'-дидезоксинуклеозидов.

Условия хранения: -20 °С.

Терминирующий трифосфат, аналог трифосфатов на основе 2',3'-дидезоксинуклеозидов.

Условия хранения: -20 °С.

Реагент для мечения ДНК с использованием ПЦР.

Условия хранения: -20 °С.

Терминирующий аналог dCTP для секвенирования.

Условия хранения: -20 °С, допускается на короткий период (до 1 недели) хранение при комнатной температуре.

Терминирующий аналог dCTP для секвенирования.

Условия хранения: -20 °С, допускается на короткий период (до 1 недели) хранение при комнатной температуре.

Терминирующий аналог dUTP для секвенирования.

Условия хранения: -20 °С, допускается на короткий период (до 1 недели) хранение при комнатной температуре.

Терминирующий аналог dGTP для секвенирования.

Условия хранения: -20 °С, допускается на короткий период (до 1 недели) хранение при комнатной температуре.

Маркер молекулярного веса ДНК содержит 8 фрагментов от 250 до 3000 п.н.; фрагменты 250, 500, 750, 1000, 1500, 2000, 2500 и 3000 п.н.; концентрация ДНК-маркера — 0,1 мг/мл; предварительно смешан с буфером для нанесения; рекомендуемый объём для нанесения на гель — 2 мкл; условия хранения: -20 °C.

Маркер молекулярного веса ДНК содержит 10 фрагментов от 100 до 1000 п.н.; фрагменты 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900 и 1000 п.н; имеет эталонные полосы (повышенной концентрации) при 500 п.н., что облегчает идентификацию в геле; предварительно смешан с буфером для нанесения; рекомендуемый объём для нанесения на гель — 2 мкл; условия хранения: -20 °C.