Набор для ПЦР с Taq-полимеразой Hot Start, ПЦР-буфер с 10 мМ MgCL₂, Диаэм, Диаэм

Набор реактивов для ПЦР с Taq-полимеразой Hot Start (+MgCl₂) содержит рекомбинантную HS-Taq ДНК-полимеразу и растворы всех необходимых компонентов для проведения стандартной ПЦР c “горячим” стартом (за исключением матрицы ДНК и праймеров). ПЦР-буфер, входящий в состав набора, уже содержит MgCl₂ в концентрации 10 мМ, достаточной для постановки большинства рутинных ПЦР.

HS-Taq ДНК-полимераза представляет собой рекомбинантную Taq ДНК-полимеразу, инактивированную специфическими моноклональными антителами. HS-Taq ДНК-полимераза не активна при температуре до +70 °С. Это позволяет избежать образования неспецифических продуктов и праймер-димеров при низкой температуре на стадии смешивания компонентов ПЦР-смеси. Активация осуществляется на первом цикле ПЦР путём инкубации в течение 5 мин при +95 °С. Рекомбинантная Taq ДНК-полимераза обладает 5´-3´ ДНК-зависимой полимеразной активностью и 5’-3’ экзонуклеазной активностью нативной Taq ДНК-полимеразы из Thermus aquaticus. Скорость продвижения Taq ДНК-полимеразы зависит от сложности ДНК-матрицы и составляет примерно 1 т.п.н./мин. HS-Taq ДНК-полимераза идеально подходит для стандартной ПЦР с матрицы до 5 т.п.н.; она обладает способностью присоединять адениновый остаток к 3’-концу синтезируемой цепи, поэтому продукты ПЦР могут использоваться для ТА-клонирования.

5× ПЦР-буфер (+MgCl₂) оптимизирован для проведения эффективной и воспроизводимой ПЦР. В состав буфера входят MgCl₂ (10 мМ) и добавки, повышающие время полужизни и процессивность HS-Taq ДНК-полимеразы за счет повышения её стабильности во время ПЦР. Буфер химически стабилен, инертен и не меняет оптимальной температуры отжига праймеров или характеристики плавления матрицы. Входящие в набор 50 мМ раствор MgCl₂ и 50× смесь dNTP позволяют легко оптимизировать реакционную смесь под конкретную систему «матрица-праймеры», а 6× Буфер для нанесения на гель облегчает пробоподготовку для электрофореза ПЦР-продуктов и контроль над ходом электрофореза.

Состав набора

Кат. #	HS-Taq DNA-полимераза, 5 ед. акт./мкл*	5× ПЦР буфер (+MgCl2)	50 мМ MgCl2	50× смесь dNTP (10 мМ каждого)	6×буфер для нанесения на гель	Кол-во, ед. акт.
1958.0500	1 × 100 мкл	2 × 1.5 мл	1 × 1 мл	2 × 200 мкл	1 × 1.5 мл	500
1958.2250	3 × 150 мкл	8 × 1.5 мл	2 × 1 мл	4 × 400 мкл	3 × 1.5 мл	2250

* За единицу активности принимали количество фермента, катализирующее включение 10 нмоль dNTP в кислотонерастворимый продукт за 30 мин при 74 °С. Условия реакции: 50 мМ Трис-HCl, pH 9.0 (при 25 °С), 50 мМ NaCl, 10 мМ MgCl₂, 200 мM dATP, 200 мM dCTP, 200 мM dGTP, 50 мM [³H] dTTP, 0,25 мг/мл активированной ДНК из тимуса теленка.

Буфер для хранения HS-Taq ДНК-полимеразы:
50 мМ Трис-HCl, pH 8.0 (при 25 °С), 50 мМ NaCl, 0.1 мМ ЭДТА, 1мМ дитиотреитол, 50% (v/v) глицерин и 1% (v/v) Тритон Х-100.

5× ПЦР буфер (+MgCl₂):
50 мM Трис-НCl, рН 8.5 (при 25 °С), 250 мM KCl, 10 мМ MgCl₂, 0.5% (v/v) Tween 20, стабилизаторы Taq ДНК-полимеразы.

Область применения:
ПЦР с “горячим” стартом.
Высокопроизводительная ПЦР.
Обычная ПЦР с высокой воспроизводимостью.
Наработка ПЦР-продуктов для ТА клонирования.
Вторая стадия ОТ-ПЦР.

Ограничения к использованию:

• Не рекомендуется использовать для ампликонов длиной свыше 5 тыс. п.н.
  

Ингибирование и инактивация
Ингибиторы: ионные детергенты (дезоксихолат натрия, саркозил и додецилсульфат натрия (SDS) в концентрациях выше, чем 0,06, 0,02 и 0,01%, соответственно).
Инактивируется экстракцией смесью фенол/хлороформ.

Хранение и транспортировка: при -20 °С; не более 50 циклов замораживания-размораживания.

Срок хранения: при соблюдении условий хранения и транспортировки 1 год.

1958_ Набор реактивов для ПЦР с Taq-полимеразой и 10 мМ MgCl2, инструкция, Стар-лаб, русск., 4 стр.