Набор для получения полноразмерных кДНК методом ПЦР TeloPrime Full-Length cDNA Amplification Kit V2, Lexogen, Lexogen

В основе набора — разработанная компанией «Лексоген» технология лигирования специфических линкеров к кэпированному 5’-концу мРНК, (Cap-Dependent Linker Ligation, CDLL) в сочетании с обратной транскрипцией длинных последовательностей. Эта технология обеспечивает высокую селективность в отношении полноразмерных мРНК, которые обладают как кэпированным 5’-концом, так и полиаденилированным 3’-концом. Использование наборов TeloPrime обеспечивает полную представленность транскриптома и возможность длинных прочтений при его секвенировании.

Особенности наборов TeloPrime:

• высокая специфичность по отношению к 5’-кэпам и 3’-полиА;
• Новое! оптимизированы синтез второй цепи кДНК и её амплификация для преимущественного синтеза длинных кДНК (> 2 кб);
• набор идеален для секвенирования по технологии Oxford Nanopore, дающей длинные риды;
• все стадии — в одном протоколе;
• требуемое исходное количество РНК минимально — от 1 нг до 2 мкг;
• гибкий протокол предусматривает возможность использования пользовательских праймеров для обратной транскрипции.

Области применения наборов TeloPrime:

• подготовка библиотек для секвенирования по технологии NGS и Oxford Nanopore;
• RACE — быстрая амплификация концов кДНК;
• получение РНК-проб;
• получение кДНК для клонирования.

Протокол включает в себя следующие стадии:

• синтез первой цепи кДНК путём обратной транскрипции с олиго(дТ) праймером;
• лигирование специфического олигонуклеотидного дуплекса с 5’-концом полноразмерных дуплексов мРНК-кДНК;
• синтез второй цепи кДНК;
• амплификация двухцепочечной кДНК с праймерами, комплементарными концевым структурам полноразмерных кДНК.

В состав набора входят все необходимые реагенты и колонки для очистки продуктов реакций.
Реагенты для ПЦР также можно приобрести отдельно в виде TeloPrime PCR Add-on Kit V2.

Наборы TeloPrime обеспечивают более высокую точность при идентификации сайта начала транскрипции по сравнению с другими методиками синтеза кДНК — переключением цепи или использованием кэпирующих олигонуклеотидов.