Экстра-микс для количественной ПЦР в режиме реального времени HS-qPCR SYBR Blue (2х), Диаэм, Диаэм

Экстра-микс HS-qPCR SYBR Blue предназначен для проведения количественной ПЦР в режиме реального времени с использованием флуоресцентного красителя SYBR Green I и представляет собой 2-кратную реакционную смесь, содержащую все компоненты, необходимые для проведения ПЦР в режиме реального времени (исключая ДНК-матрицу и праймеры):

• высокопроцессивную рекомбинантную HS-Taq ДНК-полимеразу с "горячим" стартом,
• смесь дезоксинуклеозидтрифосфатов,
• ПЦР-буфер,
• Mg²⁺ (3 мМ),
• интеркалирующий краситель SYBR Green I
• инертный краситель

Экстра-микс HS-qPCR SYBR Blue оптимизирован для проведения количественной ПЦР в режиме реального времени. В его состав входят добавки, повышающие время полужизни и процессивность HS-Taq ДНК-полимеразы за счет повышения её стабильности во время ПЦР, а также вещества, влияющие на температуру отжига праймеров и характеристики плавления матрицы, что позволяет повысить специфичность ПЦР и использовать матрицы со сложной пространственной структурой. Инертный краситель в составе Экстра-микса HS-qPCR SYBR Blue окрашивает его в голубой цвет (максимум поглощения – 615 нм) и облегчает контроль за раскапыванием смеси при использовании многолуночных планшетов.

SYBR Green I - флуоресцентный интеркалирующий краситель для количественной и качественной детекции продуктов в ходе ПЦР в режиме реального времени. SYBR Green I обеспечивает простой и экономичный вариант для детекции и количественного определения ПЦР-продуктов без необходимости использования специфичных флуоресцентных зондов. В ходе амплификации краситель SYBR Green I встраивается в малую бороздку ДНК ПЦР-продуктов и испускает более сильный по сравнению с несвязанным красителем флуоресцентный сигнал. Максимумы поглощения и испускания SYBR Green I - 494 нм и 521 нм соответственно, что позволяет использовать его со всеми известными на сегодняшний день амплификаторами для проведения ПЦР в режиме реального времени.

HS-Taq ДНК-полимераза, входящая в состав экстра-микса, неактивна при комнатной температуре. Для её активации необходим прогрев реакционной смеси при 95 °С в течение 5 мин. П Рекомбинантная HS-Taq ДНК-полимераза обладает 5´-3´ ДНК-зависимой полимеразной активностью и 5’-3’ экзонуклеазной активностью нативной Taq ДНК-полимеразы из Thermus aquaticus. Скорость продвижения Taq ДНК-полимеразы зависит от сложности ДНК-матрицы и составляет примерно 1 т.п.н./мин. Рекомбинантная HS-Taq ДНК-полимераза идеально подходит для стандартной ПЦР с матрицы до 5 т.п.н.

Кроме экстра-микса, в состав набора также включены 50 мМ MgCl_₂ и стерильная вода. Входящий в набор раствор MgCl_₂ позволяет легко оптимизировать реакционную смесь под конкретную систему "матрица-праймеры". Форма реагентов для проведения ПЦР в виде экстра-микса экономит время и снижает вероятность контаминации за счет малого числа шагов пипетирования.

Состав Экстра-микса HS-qPCR SYBR Blue:

• 100 мM Трис-НCl, рН 8.5 (при 25 °С);
• 100 мM KCl;
• 0,4 мМ каждого дезоксинуклеозидтрифосфата;
• 3 мМ MgC₂;
• 0,06 ед. акт./мкл Taq ДНК-полимеразы;
• 0,025 % Tween 20;
• стабилизаторы HS-Taq ДНК-полимеразы;
• SYBR Green I;
• инертный краситель.

Состав набора

Кат. №	Кол-во реакций по 50 мкл	HS-Taq qPCR SYBR Blue(2х)	50 мМ MgCl₂	Вода
1974.0200	200	4 х 1,25 мл	1 х 1 мл	4 х 1,25 мл
1974.1020	1020	17 х 1,5 мл	2 х 1,8 мл

Преимущества использования экстра-микса:

• Фермент с “горячим” стартом повышает специфичность, чувствительность и выход реакции.
• Для активации HS-Taq ДНК-полимеразы требуется не более 5 мин.
• Сокращается время на подготовку реакции.
• Снижается вероятность контаминации при смешивании компонентов ПЦР.
• Стандартизируются условия постановки однотипных реакций (снижается погрешность при смешивании компонентов ПЦР в разных экспериментах).
• Инертный краситель облегчает пробоподготовку при постановке ПЦР.

Область применения:

• ПЦР в режиме реального времени с использованием интеркалирующего красителя SYBR Green I.
• Обычная ПЦР.

Ограничения к использованию:
Не рекомендуется использовать для ПЦР в реальном времени с флуоресцентно-меченными зондами. Для таких приложений следует использовать Экстра-микс HS-qPCR (2×).

Срок хранения и транспортировка:
1 год при -20 °С; не более 50 циклов замораживания-размораживания.

1974_Экстра-микс для кол ПЦР HS-qPCR SYBR Blue, инструкция, Стар-лаб, русск., 3 стр.