ДНК-полимераза Phusion U Hot Start – новая термостабильная ДНК-полимераза, полученная генно-инженерным путём. Благодаря внесению модификации в дНТФ-связывающий карман полимеразы Phusion было снято ограничение, характерное для высокоточных полимераз – неспособность встраивать дезоксиурацилтрифосфат.
Phusion U способна как встраивать урациловый остаток, так и считывать его в ДНК-матрице.
Помимо этого,
Phusion U обладает всеми характеристиками ДНК-полимераз Phusion – точностью, скоростью, способностью синтезировать длинные последовательности (до 20 тыс. п.н.). Частота ошибок у полимеразы Phusion U в 25 раз ниже, чем у стандартной
Taq ДНК-полимеразы. Встроенная функция горячего старта реализуется благодаря комбинации фермента со
специфическим лигандом Affibody, ингибирующим полимеразную и 3’→5’ экзонуклеазную активности при комнатной температуре.
Эти особенности делают ДНК-полимеразу Phusion U оптимальным ферментом для амплификации повреждённой ДНК, ДНК после бисульфитной конверсии, а также для постановки ПЦР со сниженным риском контаминации.
Наборы Phusion U Green Hot Start комплектуются 5-кратными
буферами Phusion Green, содержащими утяжеляющий агент и два маркерных красителя. Это позволяет наносить продукты ПЦР на гель без добавления дополнительных реактивов для электрофореза. Утяжеляющий агент и маркерные красители инертны, не влияют на ПЦР и не мешают использованию ПЦР-продуктов в реакциях лигирования или рестрикции, а также при секвенировании.
ДНК-полимераза Phusion U Hot Start синтезирует ПЦР-продукты с тупыми концами.
Условия хранения - 20 °С.
Особенности наборов Phusion U Green Hot Start:
- высокая точность синтеза (в 25 раз выше по сравнению с Taq);
- способность встраивать в ДНК дУТФ и использовать урацил-содержащие последовательности ДНК в качестве матрицы;
- отсутствие неспецифического синтеза и деградации праймеров в процессе подготовки ПЦР;
- высокая скорость синтеза – 1 тыс. п.н. за 15-30 секунд;
-
возможность нанесения ПЦР-продуктов на гель непосредственно после амплификации без добавления реагентов для электрофореза.
Области применения:
- амплификация ДНК после бисульфитной конверсии;
-
амплификация повреждённой или деградированной ДНК;
-
ПЦР с минимальным риском контаминации посторонними ПЦР-продуктами;
-
методы клонирования на основе вырезания урациловых остатков (
USER).
В состав набора входят:
- ДНК-полимераза Phusion U Hot Start (2 Ед/мкл);
-
5Х буфер Phusion Green HF*;
-
5Х буфер Phusion Green GC*;
-
ДМСО.
* в состав 5Х буферов Phusion уже входит 7,5 мМ MgCl₂.