Цифровая ПЦР (digital PCR) – обзор современных решений

18.05.2022
Цифровая ПЦР – высокоточный современный метод количественного анализа нуклеиновых кислот.

Цифровая ПЦР – высокоточный современный метод количественного анализа нуклеиновых кислот. Идея проведения такой ПЦР появилась в конце 90-х годов 20 века и окончательно воплотилась в жизнь к 2011 г, когда компания Bio-Rad представила научному сообществу первую работающую систему цифровой ПЦР.

Принцип действия цифровой ПЦР

Принцип нового метода заключается в разделении общей реакционной смеси на большое (десятки тысяч) количество отдельных микрореакций, в каждой из которых параллельно друг другу идет одна и та же ПЦР с молекулой ДНК (в идеале одной) которая случайно распределилась в данную микрореакцию. Главным отличием подобной ПЦР от количественной ПЦР-РВ является то, что ведется фактически качественный анализ присутствия в каждой лунке ампликонов в конечной точке по типу «да» / «нет» и при этом различия в выходе на плато процессов амплификации для амплифицируемых в разных лунках образцов никак не влияют на расчет количества исходных ампликонов. Фактически лунка с сигналом обозначается компьютерной «1», а лунка без сигнала – «0», то есть налицо бинарная запись результатов амплификации, ввиду чего данный вариант ПЦР и был назван цифровым.

Принцип нового метода заключается в разделении общей реакционной смеси на большое (десятки тысяч) количество отдельных микрореакций, в каждой из которых параллельно друг другу идет одна и та же ПЦР с молекулой ДНК (в идеале одной) которая случайно распределилась в данную микрореакцию

Принцип действия цифровой ПЦР

Достоинства и применение цифровой ПЦР

Преимущества цифровой ПЦР перед ПЦР в «реальном времени»:

  • не зависит от значения Ct, различия в эффективности ПЦР разных образцов оказывают значительно меньшее влияние на количественные результаты;
  • позволяет детектировать единичные молекулы матрицы даже при низкой концентрации в образце (ввиду нанообъемов смеси);
  • позволяет получить абсолютные значения (число копий на реакцию) без использования стандартной кривой;
  • позволяет обнаружить редкий вариант мишени в сложном окружении (при qPCR сигнал редкой мутации легко теряется из-за менее эффективной амплификации).

Важно понимать! Цифровая ПЦР не заменяет ПЦР в «реальном времени», но значительно расширяет возможности исследователя!

Основные применения метода цифровой ПЦР

  • Обнаружение редких мутаций в онкологии.
  • Обнаружение редких патогенов.
  • Подсчет вирусной нагрузки.
  • Создание стандартов и референсных образцов.
  • Обнаружение ГМО.
  • Исследование копий генов.
  • Анализ библиотек для NGS.
  • Подтверждение результатов NGS.
Области использования цифровой ПЦР

Цифровая ПЦР от компании Bio-Rad

Bio-Rad – традиционно первая компания, освоившая производство систем для цифровой ПЦР. Принцип работы этих приборов отличается от других тем, что разбивка реакционной смеси на микрореакции происходит путем генерирования микрокапель в эмульсии (в связи с чем технология называется капельной цифровой ПЦР – droplet digital PCR). Затем смесь, разбитая на десятки тысяч микрокапель амплифицируется в стандартном термоциклере, после чего помещается в специальный ридер, в котором капли с прошедшей ПЦР проходят друг за другом через луч лазера.

Рабочий процесс капельной цифровой ПЦР Bio-Rad. За запуск можно проанализировать до 96 или даже до 480 образцов.
Этапы рабочего процсса цифровой ПЦР

Рабочий процесс капельной цифровой ПЦР Bio-Rad


Значительным преимуществом систем Bio-Rad перед аналогичными приборами является их высокая производительность. За запуск можно проанализировать до 96 или даже до 480 образцов, что может быть полезно тем пользователям у кого данный метод широко используется (например, фармпроизводства). Кроме того, используя для амплификации обычный планшетный термоциклер с градиентным блоком можно легко оптимизировать ПЦР под свои задачи. Однако одним из недостатков является значительное количество специальных расходных материалов для генерации реакционной смеси.

На данный момент доступны следующие варианты приборов:

Система QX200 для цифровой ПЦР в каплях, с ноутбуком и ПО – система состоящая из генератора капель, амплификатора и ридера флуоресценции. Предполагает ручные этапы подготовки реакционной смеси, переноса в планшет и загрузки в ридер.

Система QX200 для цифровой ПЦР в каплях, с автоматической системой генерации капель – осуществляет автозагрузку образцов в генератор капель, генерирует капли и автоматически переносит их в планшет для ПЦР, что уменьшает вероятность контаминации.

Система QX ONE для мультиплексного цифрового ПЦР в каплях, автоматическая, 4 канальная – моноблок, который автоматизирует каждый этап процесса цифровой капельной ПЦР, включая генерацию капель, амплификацию и анализ результатов в одном приборе. Прибор способен проводить амплификацию пяти 96-луночных планшетов одновременно, обеспечивая возможность анализа до 480 образцов за прогон. Система имеет четыре канала измерения флуоресценции; совместима со всеми мастер-миксами и наборами для цифровой ПЦР в каплях.

Также компания производит большое количество расходных материалов и готовых реагентов для своих систем.

Цифровая ПЦР от компании Thermo FS

В отличие от Bio-Rad компания Applied Biosystems (в настоящее время часть Thermo FS) реализовала в цифровой ПЦР в 2013 г другой принцип генерирования микрореакций, путем распределения реакционной смеси на кремниевой подложке, перфорированной на 20 000 микроотверстий.

Чип для цифровой ПЦР и система для ее проведения QuantStudio 3D

Устройство чипа для цифровой ПЦР Applied Biosystems


Таким образом был создан чип для цифровой ПЦР и система для ее проведения QuantStudio 3D. Эта система также состоит из нескольких частей: загрузчик чипов (распределяющий по чипу реакционную смесь), амплификатор с плоским термоблоком для чипов и ридер флуоресценции. Несомненным преимуществом данной системы является загрузка одного образца на чип (что позволяет лаборатории с небольшим количеством исследований загружать столько чипов сколько у них на данный момент образцов), а также минимальное количество расходных материалов (все что нужно это набор чипов и оптимизированный мастер-микс для проведения цифровой ПЦР).

В конце 2021 года Thermo FS анонсировала новейшую систему для цифровой ПЦР в моноблочном исполнении QuantStudio Absolute Q – это прибор, который проводит все этапы цифровой ПЦР (распределение реакционной смеси, термоциклирование, детекция флуоресценции, анализ данных), определяет абсолютное количество мишени за 90 минут, анализируя более 95% образца, имеет простой процесс подготовки реакции сходный с пробоподготовкой при количественной ПЦР, и возможность мультиплексирования с использованием до четырех оптических каналов системы.

Распределение реакционной смеси осуществляется в специальных планшетах на 16 образцов (возможно масштабирование эксперимента 4,8,12 или 16 образцов), каждый образец распределяется прибором на 20 480 микрокамер. Кроме того, уникальность данной системы заключается в том, что она позволяет (в отличие от аналогов) использовать не менее 95% загружаемого образца, тем самым резко повышая статистическую значимость и точность получаемого результата (у других аналогичных систем от 30% до 70% загружаемого образца не используется в реакции).

QuantStudio Absolute Q определяет абсолютное количество мишени за 90 минут, анализируя более 95% образца,

Принцип распределения реакционной смеси в QuantStudio Absolute Q


Набор необходимых расходных материалов также минимален – нужны собственно планшеты MAP16 и оптимизированный мастер-микс.


Информация для заказа:

Пока нет данных. Перейти в каталог
1864001
1864001
По запросу
По запросу
1864001вв
Стандартная цена: 26 326 542 AMD. Скидка 30%.
Стандартная цена: 26 326 542,=. Скидка 30%.
СПЕЦЦЕНА
18 428 580
18 428 580 .AMD

В клетке могут встречаться редкие мутации, например лишь в одной из нескольких сотен клеточных митохондриальных ДНК. В общей смеси при обычном ПЦР при таком сильном разведении эти мутации невозможно обнаружить. Похожая картина нередко наблюдается в отношении минорных опухолевых мутациях. Цифровой капельный ПЦР (Droplet Digital PCR) – усовершенствованный метод полимеразной цепной реакции (ПЦР), при котором реакционная смесь после добавления ДНК распыляется на множество мельчайших капель, попадающих на лунки чипа. Чип может содержать несколько десятков тысяч ячеек, на которых в каплях протекает ПЦР. При этом возможна визуализация результата реакции с каждой ячейки. По завершению реакции данный чип может быть использован для проведения секвенирования или клонирования с каждой капли.

Система QX200 Droplet Digital PCR предназначена для проведения цифровой капельной ПЦР третьего поколения, позволяющей добиться высочайшей точности и достоверности результатов. QX200 обеспечивает абсолютную количественную оценку ДНК- и РНК-мишеней как с помощью зондов так и с помощью интеркалирующего красителя EvaGreen, исключая использования калибровочных кривых .

Система включает в себя QX200 Droplet Generator (генератор микродисперсионных капель из кДНК или РНК-содержащих образцов) и QX200 Droplet Reader (позволяет осуществлять сверхчувствительный и точный автоматический анализ продуктов амплификации).

Преимущества цифрового капельного ПЦР по сравнению с RТ ПЦР:

  • гибкость системы и оптимизация ее для EvaGreen и TaqMan зондов любых производителей;
  • сверхчувствительность и сверхточность количественного анализа продуктов амплификации гена-мишени в каждой капле образца;
  • фракционирование образцов на нанокапли сводит к минимуму влияние на результат исследований таких параметров как наличие ингибиторов ПЦР и эффективности;
  • протекания амплификации за счет абсолютного подсчета гена-мишени в каждой капле;
  • отсутствие необходимости использования калибровочных кривых;
  • прямое обнаружение редкого варианта гена-мишени в сложном окружении.

Применения системы цифровой ПЦР QX200 Droplet Digital PCR:

  • Количественная оценка биомаркеров рака. Мутациям, ассоциированным с онкологией, часто удаётся избежать детектирования из-за их низкой концентрации по сравнению с фоновой ДНК дикого типа в том же образце. За счёт высокой чувствительности система QX200 позволяет детектировать и количественно оценивать мутации в концентрациях от 0,0001% (!) - одна на сто тысяч.

  • Обнаружение и оценка возбудителей заболеваний. Точная количественная оценка вирусной нагрузки крайне важна для определения состояния заболевания, разработки, утверждения и оценки эффективности терапии. QX200 обладает чувствительностью достаточной для обнаружения сверхмалых количеств вирусного генетического материала и в том числе и в сложных смесях

  • Определение количества копий гена (CNV). Вариации числа копий гена (CNV) является значимым источником полиморфизма в геноме человека. CNV ассоциируется с раком, неврологическими и аутоиммунными заболеваниями, а также с побочными эффектами при воздействии лекарственных средств. QX200 позволяет определить CNV с точностью соотношения 1.2х (!), например, пять против шести.

  • Валидация и количественная оценка библиотек NGS. С помощью технологии цифровой ПЦР можно качественно и количественно оценить библиотеку, что позволяет наиболее эффективно использовать секвенаторы.

  • Анализ экспрессии генов. Капельная цифровая ПЦР позволяет количественно определить уровень экспрессии гена. Благодаря высокой точности и чувствительности метода возможна оценка минимального 10% (!) изменения экспрессии, в том числе и при низких концентрациях.

  • Тестирование продуктов на наличие ГМО. С точностью до тысячных долей процента позволяет оценить количество генетически модифицированных ингредиентов в продуктах питания, сырье кормах.

Скачать список публикаций с использованием технологии капельной ПЦР


Скачать листовку о системе QX200 Droplet Digital PCR и её применении



Видео о цифровой ПЦР c использованием системы QX100 и ПО ddPCR



Этапы проведения эксперимента при использовании метода цифровой ПЦР.

Капельная цифровая ПЦР осуществляется в четыре последовательных этапа:

  1. Подготовка реакционной смеси. Подготавливают 20 мкл реакционной ПЦР смеси для каждого образца, затем смесь помещают в пластиковый картридж QX200 droplet генератора.

  2. Генерация капель. В соответствующие каналы картриджа заливается специальное минеральное масло, и наполненный картридж устанавливают в QX200 droplet генератор, где образцы и масло соединяются между собой по микро каналам внутри картриджа для получения эмульсии — около 20 000 монодисперсных капель для каждого из 8 подготовленных образцов. Объем каждой капли 1 нл.

  3. Полимеразная цепная реакция. Эмульсионные образцы переносятся на стандартную 96-луночную плашку для ПЦР и амплифицируются с помощью стандартного термоциклера, например C1000 touch.

  4. Считывание и анализ результатов. После завершения ПЦР плашка загружается в QX200 droplet ридер, который обеспечивает анализ флуоресцентного сигнала капель, детектируя каждую каплю по очереди и определяя, какие капли содержат мишень, а какие нет. Анализ результатов осуществляется с помощью программного обеспечения ddPCR.


Характеристики:

  • Генератор капель водно-масляной эмульсии QX200 Droplet Generator:
    • исходный объем образца, мкл ̶ 20;
    • емкость, количество образцов/картридж ̶ 8;
    • количество капель на образец ̶ 20 000;
    • габариты, ШхГхВ, мм ̶ 280 х 360 х 130;
    • вес, кг ̶ 4,5.

  • Считыватель капель QX200 Droplet Reader:
    • производительность, лунки/ч ̶ 32;
    • количество капель на 96-луночный планшет, млн. ̶ ~1,5;
    • облучение образца ̶ светоизлучающие диоды;
    • линейный динамический диапазон, порядки ̶ 5;
    • детектирование образца ̶ многопиксельный счетчик фотонов;
    • каналы детектирования ̶ FAM (EvaGreen), HEX (VIC);
    • точность ̶ ±10%;
    • габариты, ШхГхВ, мм ̶ 660 х 520 х 290;
    • вес, кг ̶ 26.

Сопутствующие разделы:

Станции выделения НК и белков

Наборы для выделения нуклеиновых кислот

Наборы для выделения нуклеиновых кислот, BioSilica

Спектрофотометры НАНО

ДНК-амплификаторы "классические"

Амплификаторы "в реальном времени"

1864100
По запросу
По запросу

В клетке могут встречаться редкие мутации, например, лишь в одной из нескольких сотен клеточных митохондриальных ДНК. В общей смеси при обычном ПЦР при таком сильном разведении эти мутации невозможно обнаружить. Похожая картина нередко наблюдается в отношении минорных опухолевых мутациях. Цифровой капельный ПЦР (Droplet Digital PCR) – усовершенствованный метод полимеразной цепной реакции (ПЦР), при котором реакционная смесь после добавления ДНК распыляется на множество мельчайших капель, попадающих на лунки чипа. Чип может содержать несколько десятков тысяч ячеек, на которых в каплях протекает ПЦР. При этом возможна визуализация результата реакции с каждой ячейки. По завершению реакции данный чип может быть использован для проведения секвенирования или клонирования с каждой капли.

Инновационная система QX200 Droplet AutoDG Digital PCR предназначена для проведения цифровой капельной ПЦР третьего поколения, позволяющей добиться высочайшей точности и достоверности результатов. Система включает в себя автоматический Droplet Generator (генератор микродисперсионных капель из кДНК или РНК-содержащих образцов) со встроенным цветным монитором, QX200 Droplet Reader (позволяет осуществлять сверхчувствительный и точный автоматический анализ продуктов амплификации) и Automated Droplet Generator, который автоматической загрузки образцов и дальнейшее его пипетирование на 96 луночный планшет в генераторе капель. Аппарат AutoDG имеет свой собственный кожух и фильтр НЕРА, что ведет к снижению вероятности загрязнения, поэтому система может быть использована на стандартном лабораторном столе, без необходимости применения бокса для ПЦР или чистой комнаты.

Принцип цифровой ПЦР в каплях

Преимущества цифрового капельного ПЦР по сравнению с RТ ПЦР:


  • исключительная чувствительность;
  • исключительная точность;
  • отсутствие калибровочных кривых;
  • прямое обнаружение редкого варианта мишени в сложном окружении;
  • отсутствие эффекта первых циклов ПЦР;
  • большая производительность;
  • ручная работа предельно упрощена и сведена к минимуму;
  • генерация капель для 96 образцов за 45 минут;
  • HEPA-фильтры для снижения риска контаминации;
  • цветной сенсорный экран с удобным программным обеспечением.

Применения системы цифровой ПЦР QX200 Droplet Digital PCR:


  • Количественная оценка биомаркеров рака. Мутациям, ассоциированным с онкологией, часто удаётся избежать детектирования из-за их низкой концентрации по сравнению с фоновой ДНК дикого типа в том же образце. За счёт высокой чувствительности система QX200 позволяет детектировать и количественно оценивать мутации в концентрациях от 0,0001% (!) - одна на сто тысяч.

  • Обнаружение и оценка возбудителей заболеваний. Точная количественная оценка вирусной нагрузки крайне важна для определения состояния заболевания, разработки, утверждения и оценки эффективности терапии. QX200 обладает чувствительностью достаточной для обнаружения сверхмалых количеств вирусного генетического материала и в том числе и в сложных смесях

  • Определение количества копий гена (CNV). Вариации числа копий гена (CNV) является значимым источником полиморфизма в геноме человека. CNV ассоциируется с раком, неврологическими и аутоиммунными заболеваниями, а также с побочными эффектами при воздействии лекарственных средств. QX200 позволяет определить CNV с точностью соотношения 1.2х (!), например, пять против шести.

  • Валидация и количественная оценка библиотек NGS. С помощью технологии цифровой ПЦР можно качественно и количественно оценить библиотеку, что позволяет наиболее эффективно использовать секвенаторы.

  • Анализ экспрессии генов. Капельная цифровая ПЦР позволяет количественно определить уровень экспрессии гена. Благодаря высокой точности и чувствительности метода возможна оценка минимального 10% (!) изменения экспрессии, в том числе и при низких концентрациях.

  • Тестирование продуктов на наличие ГМО. С точностью до тысячных долей процента позволяет оценить количество генетически модифицированных ингредиентов в продуктах питания, сырье кормах.

Этапы проведения эксперимента при использовании метода цифровой ПЦР.


Капельная цифровая ПЦР осуществляется в четыре последовательных этапа:

  1. Подготовка реакционной смеси. Подготавливают 20 мкл реакционной ПЦР смеси для каждого образца, затем смесь помещают в пластиковый картридж QX200 droplet генератора.

  2. Генерация капель. В соответствующие каналы картриджа заливается специальное минеральное масло, и наполненный картридж устанавливают в QX200 droplet генератор, где образцы и масло соединяются между собой по микро каналам внутри картриджа для получения эмульсии — около 20 000 монодисперсных капель для каждого из 8 подготовленных образцов. Объем каждой капли 1 нл.

  3. Полимеразная цепная реакция. Эмульсионные образцы переносятся на стандартную 96-луночную плашку для ПЦР и амплифицируются с помощью стандартного термоциклера, например C1000 touch.

  4. Считывание и анализ результатов. После завершения ПЦР плашка загружается в QX200 droplet ридер, который обеспечивает анализ флуоресцентного сигнала капель, детектируя каждую каплю по очереди и определяя, какие капли содержат мишень, а какие нет. Анализ результатов осуществляется с помощью программного обеспечения ddPCR.

Этапы проведения эксперимента методом цифровой ПЦР

Этапы проведения эксперимента при использовании метода цифровой ПЦР.




Сопутствующие разделы:

Станции выделения НК и белков

Наборы для выделения нуклеиновых кислот

Наборы для выделения нуклеиновых кислот, BioSilica

Спектрофотометры НАНО

ДНК-амплификаторы "классические"

Амплификаторы "в реальном времени"

12006536
По запросу
По запросу

Система QX ONE предназначена для проведения точной и мультиплексированной цифровой капельной ПЦР. Это единый инструмент, который автоматизирует каждый этап процесса цифровой капельной ПЦР, включая генерацию капель, амплификацию и анализ результатов в одном приборе. Прибор способен проводить амлификацию пяти 96-луночных планшетов одновременно, обеспечивая возможность анализа до 480 образцов за прогон. Система имеет четыре канала измерения флуоресценции; совместима со всеми мастер-миксами и наборами для цифровой ПЦР в каплях. Встроенный 24-дюймовый сенсорный экран высокого разрешения позволяет легко программировать, выполнять мониторинг реакции для каждого планшета и проводить полный анализ данных. RFID-сканер и расходные материалы со штрих-кодами RFID обеспечивают быструю и простую настройку и отслеживаемость проведения операций.


Преимущества системы QX ONE для цифровой капельной ПЦР:

  • автоматизация проведения реакции цифровой капельной ПЦР;
  • амлификация 5-ти 96-луночных планшетов одновременно, до 480 образцов за прогон;
  • расширенные возможности мультиплексирования: четыре цветовых канала в сочетании с амплитудным мультиплексированием и/или радиальным мультиплексированием позволяют обнаруживать множество уникальных целей в одной реакции;
  • новый мультиплексный супермикс оптимизирован для расширения возможностей мультиплексирования;
  • совместимость со всеми мастер-миксами и наборами для цПЦР в каплях;
  • простое в использовании ПО QX ONE;
  • интуитивно понятная настройка запуска прибора с использованием большого встроенного сенсорного экрана.

Характеристики системы QX ONE ddPCR:

  • начальный объем образца, мкл - 20;
  • максимальная пропускная способность - 480 образцов/прогон;
  • количество капель на 20 мкл образца - 20 000;
  • количество каналов измерения флуоресценции - 4;
  • детектируемые каналы - FAM, HEX (VIC), Cy5, Cy5.5;
  • термальный градиент - наличие;
  • встроенный компьютер – сохраняет данные для 100 планшетов;
  • время получения результата -6.5 часов для первого планшета, и приблизительно 4 часа для каждого последующего планшета, на основе стандартного 2-шагового протокола для капельной цифровой ПЦР;
  • габариты, ШхГхВ, см - 122 х 66 х 38;
  • вес, кг - 100 (включая монитор).

Применение QX ONE ddPCR:

  • анализ экспрессии генов - достижение надежных и воспроизводимых результатов измерения небольших кратных изменений для мРНК и микроРНК в низкой концентрации;
  • исследования биомаркеров рака и вариаций числа копий - измерение различных степеней мутаций при раковых заболеваниях, обнаружение редких копий ДНК-мишени;
  • обнаружение патогена - предельная точность для количественной оценки небольших кратных изменений в молекулах ДНК или РНК-мишени при обнаружении и мониторинге патогена;
  • секвенирование следующего поколения - выполнение ортогонального тестирования результатов NGS;
  • экологический мониторинг - тестирование широкого спектра экологических образцов, например, таких как почва и вода;
  • тестирование пищевых продуктов - выполнение рутинной оценки сложных генетически модифицированных организмов (ГМО) с использованием проверенных наборов и методов цифровой капельной ПЦР.


4484078
По запросу
По запросу
ДНК-амплификатор ProFlex с реакционным блоком Dual flat предназначен для использования с планшетами OpenArray (совместимы с системой ПЦР в реальном времени QuantStudio 12K Flex) и чипами 20K Chip для системы цифровой ПЦР QuantStudio 3D.
Модель совместима со сменными реакционными блоками других форматов (3×32×0,2 мл; 96×0,2 мл; 2×96×0,2 мл; 2×384×0,02 мл).
Поддерживает функцию симуляции температурных характеристик основных моделей ДНК-амплификаторов (BioRad C1000 Touch, BioRad MyCycler, Applied Biosystems 9700, Applied Biosystems 9600, Applied Biosystems Veriti).

  • Реакционный блок — Dual flat (планшеты OpenArray/ чипы 20K Chip);
  • допустимый объём образца — 33 нл;
  • максимальная скорость нагрева/охлаждения блока — 1,6 °С/сек;
  • без градиента температур и блока VeriFlex;
  • подогреваемая крышка (до 105 °С);
  • диапазон рабочих температур — 0-100 °C;
  • точность поддержания температур — ± 0,25 °C;
  • гомогенность температуры по блоку — ± 0,5 °C;
  • цветной сенсорный дисплей 8,4 дюйма;
  • USB-порт позволяет загружать программы с карт памяти;
  • автоматический перезапуск при сбое в электропитании;
  • порт RS232 для подключения датчика комплекта проверки температуры;
  • поддержка WiFi и Thermo Fisher Connect позволяет загружать данные с мобильного устройства или компьютера;
  • потребляемая мощность — 950 Вт;
  • габариты (Ш × Г × В) — 330 × 565 × 272 мм;
  • вес — 19,6 кг.

Комплект поставки: ДНК-амплификатор ProFlex с реакционным блоком Dual flat, один год гарантии.
A53267_компл
По запросу
По запросу

Система QuantStudio Absolute Q – это единый прибор для всех этапов цифровой ПЦР, который позволяет проводить абсолютное определение количества мишени за 90 минут, анализируя более 95% образца, имеет простой процесс подготовки реакции сходный с пробоподготовкой при кПЦР, и возможность мультиплексирования с использованием до четырех оптических каналов системы.

Принцип цПЦР состоит в том, что реакционная смесь после добавления ДНК делится на множество микрореакторов, в каждом из которых проходит амплификация целевого участка ДНК. Некоторая часть этих реакций содержит целевую молекулу (положительный результат), в то время как другие не содержат (отрицательный результат). Соотношение количества положительных и отрицательных ПЦР используются для подсчета общего количества молекул образца. Таким образом цПЦР позволяет провести абсолютное количественное определение без потребности в калибровочных кривых.

В системе QuantStudio Absolute Q амплификация ДНК и оценка продуктов ПЦР проводятся на микрофлюидном планшете MAP16, обеспечивающем легкую и последовательную оцифровку 20 000 точно определенных микрореакторов. С менее чем 5% «мертвого» объема, система с высокой точностью определяет редкие мишени.

Области применения системы QuantStudio Absolute Q

  • Обнаружение редких мутаций в онкологии;
  • обнаружение редких патогенов, оценка вирусной нагрузки;
  • создание стандартов и референтных образцов;
  • мониторинг семян и продуктов на наличие ГМО контаминации;
  • исследование копийности генов;
  • анализ библиотек для NGS;
  • подтверждение результатов NGS.

Технические характеристики системы QuantStudio Absolute Q

Система QuantStudio Absolute Q имеет следующие параметры:

  • анализируемый выход, % – более 95;
  • время прохождения амплификации, мин – 90;
  • кол-во образцов за запуск – 16 (может быть запущен в формате 4, 8, 12, 16 образцов за запуск);
  • объем реакционной смеси, мкл – 9;
  • кол-во микрореакторов – 20 480;
  • заполнение камеры с микрореакторами, % – 99;
  • чувствительность, копий – 1–100,000;
  • точность, % – ±10;
  • количество каналов измерения флуоресценции – 4;
  • совместимость с красителями – FAM, HEX, VIC, ABY, ROX, CY5, JUN;
  • габариты, Ш × Г × В, см – 62 × 60 × 54;
  • вес, кг – 60.

Комплектация QuantStudio Absolute Q

  • Система для цПЦР QuantStudio Absolute Q;
  • компьютер;
  • стартовый набор: 12 планшетов MAP16, крышки для стрипов, изоляционный буфер, 5х ДНК мастер-микс, верификационный набор;
  • гарантийное обслуживание – 1 год;
  • 1 день обучения на площадке заказчика.

См. также:

ДНК-амплификаторы "в реальном времени"

ДНК-амплификаторы "классические"

Запаиватели, запечатыватели планшетов

Пленки, фольга, маты, воск для планшетов

Пробирки, планшеты для ПЦР

ПЦР-боксы



Ниже вы можете задать вопрос или оставить запрос в свободной форме

Ваш заказ будет обработан
в ближайшее время.
Мы пришлем уведомление, как только все будет готово. Спасибо!