Существует множество методов качественного и количественного анализа белковых соединений: ИФА, хроматография, электрофорез и блоттинг. Эти методы доступны и популярны в науке, но они не позволяют получить информацию о способности белка взаимодействовать с другими белками. Как узнать, насколько антитела специфичны в отношении антигена и насколько сильно их взаимодействие?
SPR, или поверхностный плазмонный резонанс, это метод, который используется для изучения взаимодействий между молекулами в реальном времени без использования репортных меток. Этот метод основан на явлении поверхностного плазмонного резонанса, которое возникает, когда поляризованный свет лишь частично отражается от тонкой металлической пленки, (золота или серебра), и возбуждает электроны на поверхности металла.
В SPR анализе используется датчик, покрытый слоем металла, на который наносятся молекулы-мишени. Когда анализируемые молекулы связываются с мишенями на поверхности датчика, это приводит к изменению угла резонанса отраженного света, что можно измерить и проанализировать. Это изменение угла резонанса коррелирует с массой связанных молекул и позволяет определить кинетику и аффинность взаимодействия молекул.
В эксперименте SPR одна молекула (лиганд) иммобилизуется на сенсоре (позолоченной пластине). Далее, через микрофлюидные каналы на поверхность пластины подается образец. При взаимодействии «пришитых» молекул и аналита происходит изменение резонанса молекул, что вызывает изменение в отражённом поляризованном пучке. Такое изменение измеряется в резонансных единицах (RU) и пропорционален массе молекул на поверхности, и для любого данного взаимодействия реакция пропорциональна количеству молекул, связанных с поверхностью.
При этом, все изменения резонансного состояния молекул на пластине записывается и отображается в виде сенсограммы в режиме реального времени. Такие сенсограммы позволяю наблюдать как динамику взаимодействия (чем быстрее взаимодействуют молекулы — тем круче кривая сенсограммы), так и количество связанных молекул (чем крупнее комплекс, тем больше комплексов образовалось). При разрушении комплекса, мы видим изменение сенсограммы в обратную сторону и можем судить как быстро деградирует комплекс и как много комплексов разрушилось. Соотношение динамики образования комплекса (Ka) и его разрушение (Kd) позволяет вычислить аффинность взаимодействия молекул.
SPR S-Class, Polariton — это современная высокопроизводительная система без маркерного анализа кинетики взаимодействия молекул, использующая технологию поверхностно плазмонного резонанса (SPR, Surface plasmon resonance). Это мощный инструмент для исследования молекулярных механизмов, биологических процессов и разработки лекарств.
Система S-Class оснащена 8-канальным модулем отбора образца и 8 высокоточными шприцевыми насосами, что позволяет осуществлять отбора образцов из отдельных лунок 96- или 384-луночного планшета.
Благодаря высокой производительности и возможности наблюдать процесс онлайн, система S-Class станет незаменимым помощником в таких областях как: скрининг и селекция клонов- продуцентов, а также молекул-кандидатов при разработке новых фармацевтических препаратов.
Система S-Class имеет усовершенствованную систему независимого отбора 8 образцов из 96 и 384 лун., которая позволяет анализировать только нужные лунки планшета и повысить производительность системы.
См. также:
С помощью личного кабинета Вы сможете: