Наборы CloneJET PCR для клонирования фрагментов ДНК с липкими и тупыми концами

Современные ДНК-лигазы одинаково быстро и эффективно сшивают как липкие, так и тупые концы. Одна из таких разновидностей лигаз используется в готовых наборах для клонирования CloneJET PCR, Thermo Fisher Scientific.

Наборы CloneJET PCR – это оптимизированные системы с позитивной селекцией для эффективного клонирования ПЦР-продуктов, синтезированных любыми термостабильными ДНК-полимеразами. С помощью наборов CloneJET PCR можно клонировать ДНК-фрагменты с любыми концами – тупыми или липкими, фосфорилированными или не фосфорилированным. Лигирование занимает всего 5 минут, а выход рекомбинантных клонов составляет более 99% благодаря использованию вектора pJET1.2/blunt с позитивной системой селекции.

Примеры применения:

• клонирование продуктов ПЦР с тупым или 3'-dA-концом длиной до 10 кб;
• клонирование фрагментов ДНК, генерируемых рестрикционными ферментами;
• секвенирование клонированной ДНК;
• транскрипция in vitro и in vivo клонированных вставок из промотора T7.

Клонирование с использованием наборов CloneJET PCR включает в себя этап достройки липких концов, получающихся при использовании для ПЦР стандартной Taq-полимеразы или при рестриктазном расщеплении ДНК. При этом реакция лигирования тупоконечной вставки длиной до 3000 пар нуклеотидов с линейным вектором занимает всего 5 минут (при более длинных вставках время лигирования увеличивается). Позитивная селекция клонов со вставкой осуществляется за счёт встраивания клонируемого фрагмента в последовательность летального гена eco47IR, тем самым выключая этот ген и обеспечивая жизнеспособность рекомбинантных клонов.

Преимущества наборов CloneJET PCR:

• универсальный вариант для клонирования фрагментов с тупым или липким концами;
• быстрое клонирование ПЦР-фрагмента всего за 5 минут;
• эффективность – более 99% положительных клонов;
• отсутствие фоновых клонов с «пустым» вектором.