Флуоресцентные наборы для оценки пролиферации клеток

Анализ способности клеток к пролиферации является распространенным и важным методом в прикладной клеточной биологии. С его помощью можно судить о влиянии определенных генов, лекарств и т. д. на клетки, культивируемые in vitro, или анализировать способность клеток тканей к росту и обновлению при различных условиях или стимуляции. В настоящее время существует множество методов обнаружения пролиферации клеток.

Большинство из них используют некоторые метаболические ферменты, вырабатываемые клетками, для косвенной оценки активности клеточной пролиферации (например, метод CCK-8, метод МТТ и др.), но некоторые препараты или состояние самой клетки будут оказывать определенное влияние на результаты исследования.

Прямое обнаружение синтеза ДНК в клетках для определения клеточной пролиферации признано более точным и эффективным методом детекции.

EdU (5-Этинил-2'-дезоксиуридин, 5-этинил-2'-дезоксиуридин) – это аналог тимидина, содержащий ацетиленовую группу. При введении животным или инкубации клеток, культивируемых in vitro, эти небольшие молекулы могут быстро диффундировать в различные органы и ткани и проникать в клетки, и замещать тимидин (Т) во время синтеза и репликации молекул ДНК.

Рисунок 1. Реакция между этинильной группой встроенного EdU в двухцепочечной ДНК и азидом Alexa Fluor 488.
https://www.future-science.com/doi/10.2144/000112812

Ацетиленовая группа в молекуле EdU может реагировать с флуоресцентно меченным зондом азидного соединения, с образованием стабильного триазольного кольца при катализе ионами меди, поэтому вновь синтезированная ДНК будет помечена соответствующим флуоресцентным зондом.

Преимущества метода EdU

• Не имеет ограничивающих факторов, таких как радиоактивное загрязнение;
• не требует денатурации ДНК или реакции антиген-антитело, что значительно снижает сложность эксперимента, а также делает его более экономным по времени, более чувствительным, более стабильным и более точным.

Набор можно использовать для обнаружения клеточной пролиферации в культивируемых клетках или тканях животных. После того, как пролиферирующие клетки будут помечены, клеточное ядро будет демонстрировать ярко-зеленую флуоресценцию (при использовании набора Click-iT EdU-488). Клеточное ядро окрашивается обычным ядерным красителем (Hoechst 33342), который идёт в наборе и окрашивает ядро в синий цвет.

Рисунок 2. Пример окраски культуры клеток с использованием EdU Staining Proliferation Kit (iFluor 488).

Совместимые методы анализа

• Флуоресцентная микроскопия;
• конфокальная микроскопия;
• проточная цитометрия и сортинг.

Информация для заказа: