Новый набор для эффективной экстракции бактериального белка, НЭББ, diaGene

• Готов к использованию — одностадийный лизис клеток грамотрицательных бактерий с использованием мягкого неионогенного детергента в составе буфера.
• Удобен в использовании — добавьте реагент в бактериальный осадок, инкубируйте при перемешивании в течение 10–15 минут и извлеките растворимые белки после осаждения остатков клеток.
• Обеспечивает высокий выход рекомбинантных белков из бактериальных лизатов или очистку телец включения до почти гомогенного состояния.
• Подходит для любого масштаба экстракции белка и доступен в нескольких форматах.
• Совместим с добавлением ингибиторов протеаз.

• 123456.0010 НЭББ-10 (на 10 г биомассы бактерий):
  • 20хНЭББ-буфер 50 мл;
  • лизоцим, 0,2 мл, 50 мг/мл;
  • бензонуклеаза, 0,2 мл, 10000 ед/мл.
• 123456.0025 НЭББ-25 (на 25 г биомассы бактерий):
  • 20хНЭББ-буфер 100 мл;
  • лизоцим, 0,5 мл, 50 мг/мл;
  • бензонуклеаза, 0,5 мл, 10000 ед/мл.
• 123456.0100 НЭББ-100 (на 100 г биомассы бактерий);
  • 20хНЭББ-буфер 500 мл;
  • лизоцим, 4×0,5 мл, 50 мг/мл;
  • бензонуклеаза, 4×0,5 мл, 10000 ед/мл;

Важная информация о продукте:

• B-PER экстрагирует белки из свежих и замороженных клеток. Обычно экстракция более эффективна из замороженных клеток. Количество реагента зависит от количества клеточной пасты. Если необходимо, добавьте ингибиторы протеаз не содержащие ЭДТА, соли, и восстанавливающие агенты прямо в реагент.
• добавьте лизоцим и ДНКазу I к B-PER реагенту для более эффективной экстракции белка. Экстракция некоторых сверхэкспрессированных белков не требует добавления лизоцима;
• если добавление лизоцима и ДНКазы I может помешать последующему применению, использование этих ферментов следует исключить;
• реагент B-PER эффективно экстрагирует растворимые белки из распространенных бактериальных штаммов и особенно подходит для штаммов BL21 с дефектной протеазной экспрессией. Если лизис клеток проходит неэффективно для определенного бактериального штамма, заморозьте клетки перед экстракцией;
• лизаты цельных клеток, приготовленные с помощью реагента B-PER, совместимы с последующими приложениями, такими как количественное определение белка методом BCA или методом Брэдфорда.

Протокол экстракции белка из бактериальных клеток:

• осадите бактериальные клетки центрифугированием при 5000 g в течении 10 минут;
• если необходимо, добавьте 2 мкл лизоцима и 2 мкл ДНКазы I на 1 мл реагента B-PER. Добавьте ингибитор протеаз не содержащий ЭДТА;
• добавьте 4 мл реагента B-PER на каждый грамм осадка клеток. Суспендируйте пипетированием;
• инкубируйте 10-15 минут при комнатной температуре;
• центрифугируйте лизат при 15000 g в течении 5 минут для отделения растворимых и нерастворимых белков.

Проблемы при выделении, причины и решения:

Состав набора B-PER:

• B-PER реагент для экстракции бактериального белка, 250 мл;
• лизоцим, 0.5 мл 50мг/мл;
• ДНКаза I, 0.5 мл, 2500 ед/мл.

Сопутствующие товары Thermo Scientific:

• 78990 Реагент для экстракции белка из дрожжей Y-PER, Thermo FS;
• 89802 Реагент для экстракции белка из клеток насекомых I-PER, Thermo FS;
• 78505 Реагент для экстракции белка из культивируемых клеток млекопитающих M-PER, Thermo FS;
• 78510 Реагент для экстракции белка из тканей T-PER, Thermo FS;
• A44056 Реагент для экстракции суммарного белка из растений Pierce Plant, Thermo FS;
• 89802 Реагент для экстракции белка из насекомых I-PER, Thermo FS;
• 78115 Реагент для очистки телец включений, Thermo FS.