Диализ белков: концентрирование и обессоливание. Обзор

Диализ — процесс разделения молекул в растворе по разности их скоростей диффузии через полупроницаемую мембрану. После многократной замены внешнего раствора состав среды по обеим сторонам от мембраны (концентрация солей, pH) будет тот же, что и в окружающем растворе.

Это распространенный метод, который применяется для удаления нежелательных небольших молекул (солей, красителей и др.), из более крупных макромолекул (белков, ДНК, полисахаридов).

Диализ используется для обессоливания, удаления меченых реагентов, низкомолекулярных примесей, исследования связывания активной фармсубстанции, изучения клеток, очистки вирусов, обработки крови.

Продукция Thermo FS для диализа даёт возможность работать с образцами в широком диапазоне объёмов от 10 мкл до 250 мл. Специальные диализные ёмкости не требуют применения клипс и других дополнительных приспособлений, что позволяет сэкономить время, избегать потерь или загрязнений образца и процесс простым.

Продукты снабжены MWCO-мембраной (Molecular Weight Cut-Off), предназначенной для диализа молекул с молекулярным весом до 2; 3,5; 7; 10 или 20 кДа.

Выбор подходящего продукта определяется, в большей степени, объемом и молекулярным весом (MWCO).

Наличие у типов продуктов для диализа позиций с различными MWCO-мембранами

MWCO / Тип продукта
2K	N/A	X	X	X	X	N/A
3,5K	X	X	X	X	X	X
7K	N/A	X	X	X	N/A	X
10K	X	X	X	X	X	X
20K	N/A	X	X	X	X	N/A

Планшет и вставки (10-100 мкл)

Применяются для быстрой одновременной обработки нескольких образцов небольшого объема (до 96 образцов по 10-100 мкл). Диализ может быть проведен за 2-4 часа с выходом продукта более 90%.

Вставки имеют два варианта заказа по MWCO – 3.5K и 10K.

Ёмкости (10-2000 мкл)

Представляют собой полипропиленовые стаканчики со встроенной мембраной. Различаются по объему (до 2 мл) и MWCO. Вставляются в обычные центрифужные пробирки на 1,5; 15 и 50 мл (заказываются отдельно). Диализ происходит за 15 мин с выходом продукта боле 95%.

Планшет для диализа

Ёмкости для диализа

Пример использования ёмкости для диализа в центрифужной пробирке

Ёмкости для диализа

Кассеты (0,1-70 мл)

Обеспечивают простое и эффективное удаление буферных солей и мелких загрязнений образцов объемом от 0,1 мл до 30 мл (до 70 мл у кассет типа G2). После добавления образца в кассету её помещают в сосуд с буфером. Поплавок на верхней части кассеты обеспечивает плавучесть.

У кассет типа G2 конструкция позволяет загружать образец обычной пипеткой.

Заполнение образцом кассеты для диализа

Кассеты для диализа типа G2

Заполнение пипеткой кассеты для диализа типа G2

Кассеты для диализа типа G2

Колбы (150-250 мл)

Пригодны для работы с образцами объемом от 150 до 250 мл. Обеспечивают простое и эффективное удаление буферных солей и мелких загрязнений. Образцы могут быть легко добавлены и удалены пипеткой или путем прямой заливки через широкое отверстие в верхней крышке колбы. После чего колба помещается в сосуд с буфером. Поплавок на горлышке колбы обеспечивает плавучесть.

Мешки (15-100 мл)

Мешки (трубки) для диализа представляют собой трубочки из регенерированной целлюлозы. Концы фиксируются с помощью специальных зажимов (заказываются отдельно). Отличаются объёмом вмещаемого образца (до 100 мл), диаметром и MWCO. Диализ может быть проведен за 4 – 6 часов с выходом продукта более 90%.

Колбы

Колбы

Мешки (трубки) для диализа

Мешки (трубки) для диализа

Мешки (трубки) для диализа

Цветовая кодировка по MWCO

Для удобства пользователей производителем разработана специальная цветовая кодировка всех типов продуктов для диализа в зависимости от значения MWCO.

Замена буферного раствора

Замена буферного раствора — важный этап при подготовке образцов биологических проб, такая процедура выполняется для подготовки образцов перед выделением целевого компонента или перед последующим длительным хранением пробы. При использовании диализных кассет, мешков и других ёмкостей, необходимо достаточно большое количество буфера и затрат времени. Использование центрифужных концентраторов Vivaspin20 совместно с диализными вставками VSA005 (Sartorius) позволяют ускорить этот процесс с затратой меньшего количества буфера и эффективно проводить одновременно его обессоливание и концентрирование.

Одновременно с этим при концентрировании белков, склонных к преципитации при повышенном содержании солей, необходимо дольше их поддерживать в растворенном состоянии. Использование концентраторов с диализными вставками позволяет проводить постепенную градиентную замену буфера и более эффективно понижает концентрацию солей. А так как замена буфера при таком способе происходит значительно быстрее, целевые белки в большей степени защищены от действия протеаз.

См. также:

• Фильтрация ультра (ДНК, белков концентрирование)

• Центрифуги мультифункциональные

Ниже вы можете задать вопрос или оставить запрос в свободной форме