ПЦР: наборы, миксы

Набор для прямого синтеза кДНК SuperScript IV CellsDirect cDNA Synthesis Kit оптимизирован для синтеза кДНК непосредственно из лизата клеток млекопитающих без предварительного выделения РНК. Лизис клеток и обратная транскрипция выполняются в одной и той же пробирке, и полученная кДНК готова к использованию в ПЦР или кПЦР.

Принцип работы набора SuperScript IV CellsDirect cDNA Synthesis Kit.

В традиционной ОТ-ПЦР сначала выделяют РНК из клеток. Используя набор для синтеза кДНК SuperScript IV CellsDirect cDNA Synthesis Kit, клетки лизируют, а кДНК синтезируется из лизата в одной пробирке с минимальной обработкой и без потери образца. Обработка ДНКазой I является необязательным этапом и может быть использована для удаления геномной ДНК до синтеза кДНК. Этот набор был оптимизирован для стандартных образцов, содержащих от одной клетки до 10 000 клеток на образец.

Преимущества набора SuperScript IV CellsDirect cDNA Synthesis Kit:

• cовместимость с широким спектром типов клеток млекопитающих, выращенных в различных условиях;
• формат «все операции в одной пробирке» сводит к минимуму потерю реагентов, потерю образцов и время выполнения протокола;
• весь объем лизата может быть использован в реакции синтеза первой цепи кДНК, обеспечивая больший выход при ограниченном количестве клеток и позволяя обнаруживать редкие транскрипты;
• полученная кДНК пригодна для использования в различных приложениях, включая ПЦР и кПЦР;
• протокол реакций занимает около 37 минут;
• совместимость с мастер-миксами TaqMan и SYBR Green для кПЦР от различных производителей;
• оптимизированная производительность обратной транскрипции в диапазоне 1-10 000 клеток на образец;
• качество продукта сопоставимо с продуктами обратной транскрипции, полученными при использовании очищенной РНК.

Характеристики набора SuperScript IV CellsDirect cDNA Synthesis Kit:

• детекция результата с помощью флуоресценции;
• совместимость с кПЦР;
• амплификация GC-богатых участков.

Состав набора SuperScript IV CellsDirect cDNA Synthesis Kit:

• лизирующий раствор — 1.25 мл;
• ингибирующий раствор — 250 мкл;
• добавка для ускорения лизиса — 25 мкл;
• ДНКаза I — 55 мкл;
• мастер-микс SuperScript IV RT — 400 мкл;
• контрольный образец — 400 мкл.

Условия хранения и перевозки: -20 °C.

Мастер-микс PowerTrack SYBR Green это готовая оптимизированная, универсальная, 2-кратная смесь для проведения ПЦР в режиме реального времени. Мастер-микс содержит визуальный индикатор на основе синего красителя, который позволяет пользователю подтвердить, что образец был добавлен в реакционную смесь, тем самым минимизируя ошибки пипетирования. Опционно желтый буфер может быть добавлен к матрице (кДНК/ДНК), и при смешивании мастер-микса содержащего синий краситель и матрицы, предварительно смешанной с желтым буфером, реакционная смесь меняет цвет на зеленый, тем самым показывая, что матрица была добавлена в ПЦР-смесь.

Мастер-микс содержит все реакционные компоненты, включая оптимизированный реакционный буфер, смесь dNTP, в состав которой входит dUTP/dTTP, ДНК-полимеразу с «горячим стартом», термолабильную урацил-ДНК гликозилазу (UDG), ROX-краситель (пассивный эталонный краситель), инертный синий краситель и интеркалирующий краситель SYBR Green для детекции ПЦР-продуктов.

PowerTrack SYBR Green оптимизирован таким образом, что температура плавления праймеров может составлять от 55 до 65 °C.

Преимущества мастер-микса PowerTrack SYBR Green:

• визуальный индикатор на основе красителя для уменьшения ошибок пипетирования;
• широкий диапазон температуры плавления праймеров обеспечивают гибкость и минимальную оптимизацию реакции;
• превосходная специфичность и воспроизводимость;
• универсальная совместимость с амплификаторами;
• содержит инертный эталонный краситель ROX для нормализации флуоресценции во всех образцах;
• содержит UNG и dUTP для деградации любых ранее амплифицированных продуктов ПЦР и предотвращения загрязнение последующих реакций ПЦР;
• универсальная совместимость с наборами и мастер-миксами для обратной транскрипции;
• совместимость с мастер-миксом для SuperScript IV VILO для быстрых, воспроизводимых результатов обратной транскрипции.

Набор Single Cell-to-CT qRT-PCR Kit позволяет реализовать протокол для анализа экспрессии генов для образцов, содержащих от 1 до 10 клеток. Каждый набор содержит реагенты для подготовки образцов,обратной транскрипции, предварительной амплификации и кПЦР, которые могут быть выполнены последовательно.

Традиционные способывыделения РНК с использованием органических растворителей, колонок или магнитных частиц не подходят для анализа единичных клеток из-за потери образца в результате неполного осаждения РНК, связывания и элюирования. Кроме того, большинство методов для выделения РНК из единичной клетки не инактивируют эндогенные РНКазы и могут приводить к расщеплению РНК и переносу ингибиторов, включая загрязнение геномной ДНК, которые влияют на последующие приложения ОТ-ПЦР. Набор Single Cell-to-CT разработан для анализа единичных клеток и показывает чувствительность и воспроизводимость результатов по сравнению с традиционными методами выделения и очистки РНК.

Преимущества набора Single Cell-to-CT qRT-PCR Kit:

• простой в исполнении протокол;
• максимальная чувствительность для анализа единичных клеток;
  
• лучшая производительность и воспроизводимость по сравнению с альтернативными методами.
  

Характеристики набора Single Cell-to-CT qRT-PCR:

• время очистки и пробоподготовки — 7 минут;
• позволяет анализировать от 1 до 10 клеток в смеси;
• совместимость с двустадийной ОТ-ПЦР;
• высокая скорость ПЦР-реакции;
• требует применения олигонуклеотидных зондов TaqMan.

Состав набора Single Cell-to-CT qRT-PCR:

• ДНКаза I Single Cell — 400 мкл;
• лизирующий буфер Single Cell — 4 мл;
• ингибирующий раствор Single Cell — 400 мкл;
• обратная транскриптаза Single Cell SuperScript — 600 мкл;
• мастер-микс TaqMan Gene Expression — 50 мл;
• смесь для амплификации Single Cell Pre-Amp — 2,1 мл;
• смесь для обратной транскрипции Single Cell VILO RT — 1,2 мл.

Условия хранения и перевозки: -20 °C.