Обратная транскрипция

Область применения: синтез первой цепи кДНК для ОТ-ПЦР и ОТ-ПЦР в режиме реального времени, синтез кДНК для клонирования, получение меченых кДНК-зондов для микрочипов (microarray), мечение ДНК, анализ РНК с помощью праймер-экстеншн.

Обратная транскриптаза RevertAid — это рекомбинантная обратная транскриптаза вируса лейкемии мышей (M-MuLV) с модифицированной структурой и каталитическими свойствами. Фермент обладает РНК-зависимой и ДНК-зависимой полимеразной активностью. Обратная транскриптаза RevertAid проявляет активность РНКазы Н в меньшей степени, чем обратная транскриптаза вируса миелобластоза птиц (AMV-RT).

Особенности обратной транскриптазы RevertAid

Обратная транскриптаза RevertAid имеет следующие особенности:

• cинтезирует первую цепь кДНК до 13 тыс п.н.;
• оптимальная температура реакции +42 °С;
• активна до +50 °С;
• способна встраивать модифицированные нуклеотиды — меченые Су3, Су5, родамином родамином или флюоресцеином.
  

Области применения обратной транскриптазы RevertAid

Обратная транскриптаза RevertAid применяется в следующих областях:

• синтез первой цепи кДНК в реакциях ОТ-ПЦР или ОТ-ПЦР в реальном времени;
• синтез кДНК для клонирования или экспрессии белков;
• мечение ДНК для микрочипов;
• анализ РНК с помощью праймер-экстеншн.

Комплектуется 5-кратным реакционным буфером.

Условия хранения: -20 °С.

Рекомбинантная форма, выделенная из E. coli, не содержит доменa РНКазы Н Буфер хранения: 50 мМ трис-HCl, pH 8,0 (при 25°C ), 100 мМ NaCl, 1 мМ ЭДТА, 5 мМ дитиотрейтол, 50 % глицерин и 0,1 % NP-40. Условия определения активности: 50 мМ трис-HCl, pH 8,3 (при 25°С), 40 мМ KCl, 6 мМ KCl, 50 мM [3H] dTTP, 1 мМ дитиотрейтол, poly А 2 А260/мл, 2 мкМ d(pT)12, 100 мкг/мл БСА. Определение активности: За единицу активности принимали количество фермента, катализирующее включение 1 нмоль dTMP в кислотонерастворимый продукт за 10 мин при 37°С. Хранение и транспортировка: -20°С

Обратная транскриптаза Maxima H minus представляет собой генетически модифицированную обратную транскриптазу MMLV. Фермент обладает РНК-зависимой и ДНК-зависимой полимеразной активностью, но лишён активности РНКазы Н. Поставляется в комплекте с 5-кратным буфером RT (250 мМ Трис-HCl pH 8,3, 375 мМ KCl, 15 мМ MgCl₂, 50 мМ DTT).

Основные характеристики обратной транскриптазы Maxima H minus

Обратная транскриптаза Maxima H minus имеет следующие характеристики:

• термостабильность — температурный оптимум составляет от +50 до +60 °С, фермент сохраняет активность до 65 °С;
• отсутствие РНКазной активности позволяет синтезировать кДНК до 20 тыс. п.н.;
• высокая чувствительность и воспроизводимость — стартовое количество РНК может варьировать от 1 пг до 5 мкг;
• высокая эффективность — синтез полноразмерных кДНК занимает 15-30 минут;
• 50-кратная процессивность (по сравнению с ревертазой MMLV) обеспечивает устойчивость к ингибиторам-гуанидину, формамиду, этанолу;
• способна встраивать модифицированные нуклеотиды.