На главную / Пластик, стекло, принадлежности / Колонки, предколонки и сорбенты для жидкостной хроматографии

Колонки, предколонки и сорбенты для жидкостной хроматографии

Колонка является основным элементом жидкостного хроматографа, обеспечивающим разделение смесей веществ и очистку целевого продукта. Материалом для ее изготовления может служить нержавеющая сталь, пластиковый полимер или стекло. В конструкционном плане она представляет собой трубку или полый цилиндр, заполненный изнутри сорбентом (твердой фазой). Внутренний диаметр разных типов колонок может варьировать от 1 мм до 1 м и более.

Читать полностью

См. также

Виалы и септы хроматографические

Хроматографы жидкостные высокого давления (ВЭЖХ)

Хроматографы жидкостные низкого давления

Хроматографы жидкостные среднего давления

Шприцы Hamilton

Каталоги, статьи, видео

Сорбенты для хроматографии малых и больших биомолекул, Supelco (Merck), листовка, 2 стр., русс., 2021 г.

Колонки и расходные материалы для ВЭЖХ, Agilent, каталог, англ., 675 стр., 2012 г.

Материалом для ее изготовления может служить нержавеющая сталь, пластиковый полимер или стекло. В конструкционном плане она представляет собой трубку или полый цилиндр, заполненный изнутри сорбентом (твердой фазой). Внутренний диаметр разных типов колонок может варьировать от 1 мм до 1 м и более.

Колонка является основным элементом жидкостного хроматографа, обеспечивающим разделение смесей веществ и очистку целевого продукта. Материалом для ее изготовления может служить нержавеющая сталь, пластиковый полимер или стекло. В конструкционном плане она представляет собой трубку или полый цилиндр, заполненный изнутри сорбентом (твердой фазой). Внутренний диаметр разных типов колонок может варьировать от 1 мм до 1 м и более.

в жидкостной хроматографии получили распространение защитные колонки (для предохранения основной колонки от загрязнения) и предколонки, используемые для предварительной очистки анализируемых проб перед их инжекцией.

в жидкостной хроматографии получили распространение защитные колонки (для предохранения основной колонки от загрязнения) и предколонки, используемые для предварительной очистки анализируемых проб перед их инжекцией.

По своему предназначению хроматографические колонки подразделяются на аналитические, микропрепаративные, препаративные и промышленные. Помимо этого, в жидкостной хроматографии получили распространение защитные колонки (для предохранения основной колонки от загрязнения) и предколонки, используемые для предварительной очистки анализируемых проб перед их инжекцией.

В качестве твердой фазы в колонках используют широкое разнообразие сорбентов, в т. ч.: дисперсные и монолитные силикагели, поперечно-сшитые на основе агарозы и декстрана, полимерные синтетические (см. табл. 1), изготовленные из оксидов алюминия и циркона. По своей структуре они бывают непористыми, поверхностно-пористыми и полно-пористыми. Их также классифицируют по форме (сферическая и нерегулярная) и размеру частиц.

Тип используемого сорбента определяет область его применения в разных видах жидкостной хроматографии: нормально-фазовая (НФХ), обращенно-фазовая (ОФХ), гидрофобная (HIC), гидрофильная (HILIC), аффинная, ионообменная (анионообменная, катионообменная), ион-парная и пр.

Наиболее распространенные силикагельные сорбенты условно подразделяют на немодифицированные и химически привитые. Плотность пришивки разных функциональных групп к поверхности сорбентных частиц может варьировать от 4 до 32% в пересчете на содержащийся в них углерод. По сравнению с немодифицированным силикагелем привитая фаза этого сорбента отличаются лучшей гидролитической стойкостью, более высокой емкостью и селективностью удерживания / элюирования.

Классификация силикагельных сорбентов осуществляется по единой номенклатуре с использованием целого ряда условных обозначений (см. табл. 2). Например, приставка sil (от лат. silica) в фирменных названиях ряда сорбентов (Supelcosil, Kromasil, Hypersil и пр.) без указания связанной фазы обычно означает, что они содержат немодифицированный силикагель.

Популярные производители колонок, предколонок и сорбентов: Agilent, Cytiva, Phenomenex, Supelco (Merck), Thermo FS, Tosoh Corporation, Waters.

Таблица 1. Основные типы аффинных колонок Poros, CaptureSelect компании Thermo FS и области их применения

Наименование	Область применения
CaptureSelect CH1-XL Affinity Matrix	Очистка CH1-XL-содержащих Fab и Fab2-фрагментов и IgG антител
CaptureSelect KappaXP Affinity Matrix	Очистка каппа-содержащих Fab и Fab2-фрагментов и IgG антител
CaptureSelect KappaXL Affinity Matrix	Очистка каппа-содержащих Fab и Fab2-фрагментов и IgG антител
CaptureSelect FcXL Affinity Matrix	Очистка IgA, IgM и IgG антител
CaptureSelect C-tagXL Affinity Matrix	Очистка рекомбинантных белков
POROS CaptureSelect AAV8 Resin	Очистка 8 серотипа Аденоассоциированного вируса (AAV8)
POROS CaptureSelect AAV9 Resin	Очистка 9 серотипа Аденоассоциированного вируса (AAV8)
POROS CaptureSelect AAVX Affinity Resin	Очистка разных серотипов Аденоассоциированного вируса (AAV)
POROS MabCapture A Select RoboColumn	Очистка моноклональных антител
POROS A 20 μm	Аналитическая хроматография моноклональных и поликлональных антител
POROS G 20 μm	Аналитическая хроматография моноклональных и поликлональных антител
POROS HE 50 um	Аналитическая хроматография белков и вирусов
POROS MC 20 um	Аналитическая хроматография гистидин-меченых белков
POROS AL 20 um	Аналитическая хроматография белков
POROS EP 20 um	Аналитическая хроматография белков и других биомолекул
POROS HP2	Аналитическая хроматография белков
LC Kappa Affinity Column	Аналитическая хроматография каппа-содержащих Fab и Fab2-фрагментов и IgG антител
FG, POROS LC-lambda Affinity Column	Аналитическая хроматография лямбда-содержащих Fab и Fab2-фрагментов и IgG антител
POROS IgM	Аналитическая хроматография IgM антител
POROS IgA	Аналитическая хроматография IgА антител
POROS CH1-XL	Аналитическая хроматография CH1-XL-содержащих Fab и Fab2-фрагментов и IgG антител
POROS FcXL	Аналитическая хроматография IgA, IgM и IgG антител

Таблица 2. Сорбенты с привитыми фазами на основе силикагеля

Наименование связанной фазы	Свойства и область применения
C1, TMS, SAS, Триметил	Фаза с очень низкой емкостью и высокой селективностью разделения высокомолекулярных полярных соединений в ОФХ.
C2, RP-2, Диметил	C2 обладает более сильной удерживающей способностью, чем фаза С1, уступая по этому показателю сорбентам: С4, С8 и С18.
С3, Пропил	C3 подходит для HIC хроматографии пептидов и белков.
С4, Бутил	Фаза с более низкой емкостью и удерживающей способностью, чем у сорбентов С8 и С18. Хорошо подходит для разделения макромолекул гидрофобных белков и пептидов с помощью HIC и ион-парной хроматографии.
С5, Пентил	С5 обладает более сильной гидролитической устойчивостью по сравнению с сорбентом С4. Привитую фазу пентила с диаметром пор 300Å используют в ОФХ гидрофобных белков и пептидов.
С6, Гексил	С6 обладает более сильной удерживающей способностью, чем фазы: С1, С2, С3, С4 и С5, уступая по этому показателю сорбентам: С8 и С18. Привитая фаза гексила находит применение ион-парной хроматографии
С8, MOS, RP-8, LC8, Октил	По своей селективности фаза С8 близка к С18, но уступает ей по удерживающей способности. Этот сорбент находит широкое применение в хроматографии нуклеотидов, стероидов, пептидов, небольших гидрофильных белков и прочих биомолекул.
С12, Додецил	С12 обеспечивает лучшее чем у С18 взаимодействие с целевыми молекулами и более чёткую форму пиков для неполярных и умеренно полярных соединений.
RP Amide C16	Фаза с высокой селективностью разделения алкильных соединений
С18, ODS, RP-18, LC-18, Октадецил	Универсальная фаза с высокой емкостью удерживания в неполярных растворителях. Прекрасно работает в ион-парной хроматографии. Имеет широчайший спектр применений (разделение пептидов, нуклеотидов, стероидов, витаминов, жирных кислот, пестицидов и пр.).
AQ-C18, Полярно-модифицированный октадецил	Подходит для разделения образцов в водной фазе
Peptide ES-C18, Ди-изобутилоктадецил	Быстрое разделение пептидов и полипептидов с высокой пиковой нагрузкой
C30, Триаконтанолдиметил	Фаза с высокой селективностью разделения гидрофобных соединений, длинноцепочечных и структурно родственных изомеров
С6H5, Фенил	Обладает уникальной селективностью разделения ароматических соединений в хроматографии гидрофобного взаимодействия.
С6H5–С6H5, Biphenyl, Дифенил	Высокая селективность разделения ароматических соединений
С6H5 (линкер C3H6O), Фенил-эфир	Используют для разделения высоко-полярных ароматических веществ.
С6H5 (линкер C6H12), Фенил-гексил	Фаза с высокой селективностью разделения ароматических соединений – доноров электронов
С6F5, PFP,	Обеспечивает селективное разделение замещённых ароматических соединений.
CN, Cyano, CPS, PCN, циано, цианопропил, нитрил	Универсальная фаза как для НФХ, так и ОФХ. Обладает высокой удерживающей способность в отношении полярных соединений при слабом удерживании гидрофобных веществ. Слабая полярность и низкая емкость этого сорбента позволяет быстро уравновешивать его в режиме градиентного элюирования.
Nitro, NO2	Низко-емкая фаза селективна к ароматическим соединениям в ОФХ и применима для НФХ
NH2, APS, амино, аминопропилсилил	Фаза является слабым анионообменником с универсальной областью применения в НФХ, ОФХ и ионообменной хроматографии. Хорошо подходит для разделения углеводов.
Diol OH, Диол	Универсальная фаза как для НФХ, так и ОФХ. Используют также в гель-фильтрационной хроматографии (GFC) высоко-полярных соединений, пептидов и белков.
OH5, Пента-гидрокси	Идеально подходит для разделения высоко-полярных соединений
F5 (PFP)	Высокая селективность разделения ароматических соединений – акцепторов электронов
SCX	Сильный катионобменник
SAX	Сильный анионобменник
Карбоксил WSX	Слабый катионобменник